谷氨酸受體在成骨細(xì)胞力學(xué)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中作用的研究.pdf

1、目的：研究骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞D1和成骨細(xì)胞MC3T3-E1、MC3T3-E1 subclone 14在基底應(yīng)變作用下NMDA型谷氨酸受體(NMDAR)的表達(dá)情況，探討NMDAR在成骨細(xì)胞力學(xué)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的作用和相關(guān)的信號(hào)通路。 方法：采用RT-PCR技術(shù)，免疫熒光染色技術(shù)，蛋白免疫印跡技術(shù)和體外細(xì)胞循環(huán)拉伸基底應(yīng)變刺激的方法，鑒定在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞D1和成骨細(xì)胞MC3T3-E1、MC3T3-E1 subclone 14細(xì)胞系中NMDA

2、R的表達(dá)情況，研究MC3T3-E1 subclorle 14細(xì)胞的力學(xué)響應(yīng)；利用NMDAR非競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑MK801、細(xì)胞外鈣離子內(nèi)流信號(hào)阻斷劑EGTA、細(xì)胞微絲骨架阻斷劑細(xì)胞松弛素D單獨(dú)應(yīng)用和聯(lián)合應(yīng)用的方法，以RT-PCR、WESTERN-BLOT技術(shù)研究NMDAR參與力學(xué)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的作用和相關(guān)的信號(hào)通路。 結(jié)果：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞D1和成骨細(xì)胞。MC3T3-E1、MC3T3-E1 subclone 14三個(gè)細(xì)胞系均表達(dá)NMDAR必

3、須亞基1(NR1)和不同的亞基2(NR2A-D)；轉(zhuǎn)錄因子AP-1、CBFA1/RUNX2參與了力學(xué)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的信號(hào)通路；阻斷NMDAR，阻斷細(xì)胞外鈣離子內(nèi)流，阻斷細(xì)胞微絲骨架，都分別部分的抑制了力學(xué)刺激誘導(dǎo)的ERK1/2信號(hào)通路的激活，而分別聯(lián)合應(yīng)用MK801+EGTA、MK801+CYTO D阻斷劑時(shí)則都基本抑制了力學(xué)刺激誘導(dǎo)的ERK1/2信號(hào)通路的激活。 結(jié)論：NMDAR在成骨細(xì)胞MC3T3-E1、MC3T3-E1 subc