三氯化鋁致成骨細(xì)胞凋亡的Fas-線粒體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)以體外培養(yǎng)的SD乳鼠顱骨成骨細(xì)胞(OB)第3代為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，依據(jù)三氯化鋁(AlCl3)對(duì)OB的半數(shù)抑制濃度(IC50)，設(shè)立4個(gè)實(shí)驗(yàn)組，即空白對(duì)照組(CG)、低劑量染鋁組(LG，1/20IC50)、中劑量染鋁組(MG，1/10 IC50)、高劑量染鋁組(HG，1/5 IC50);向各組培養(yǎng)液中加入三氯化鋁(AlCl3·6H2O)溶液，其終濃度分別為0 mg/mL、0.06 mg/mL、0.12 mg/mL、0.24 mg/mL，培養(yǎng)

2、24h。應(yīng)用AO/EB雙重?zé)晒馊旧z測(cè)OB凋亡形態(tài)，并統(tǒng)計(jì)凋亡率; qRT-PCR法檢測(cè)OBFas、FasL、FADD、Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3 mRNA表達(dá);Western blot檢測(cè)OB Fas、FasL、FADD、CytC、Bid和tBid蛋白表達(dá);Caspase活性檢測(cè)試劑盒檢測(cè)OB Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3活性。旨在探討三氯化鋁致OB凋亡的Fas-線粒體信

3、號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:
　　(1)染鋁組OB均可見(jiàn)細(xì)胞核呈現(xiàn)點(diǎn)狀亮綠色的早期凋亡細(xì)胞，細(xì)胞核染為亮橘紅色的晚期凋亡細(xì)胞，與細(xì)胞核為紅色的壞死細(xì)胞;隨染鋁劑量的增加，OB凋亡數(shù)目增多，染鋁組OB凋亡率顯著高于CG(P＜0.01)，表明AlCl3可誘導(dǎo)OB凋亡。
　　(2)染鋁組OB Fas、FasL、FADD mRNA及蛋白表達(dá)量，Caspase-8 mRNA表達(dá)量及Caspase-8活性均顯著高于CG(P＜0.05;P＜

4、0.01)，說(shuō)明Fas/FasL信號(hào)通路參與了AlCl3誘導(dǎo)的OB凋亡。
　　(3)染鋁組OB胞漿中CytC蛋白表達(dá)量、Caspase-9 mRNA表達(dá)量及Caspase-9活性均顯著高于CG(P＜0.01)，說(shuō)明線粒體信號(hào)通路參與了AlCl3誘導(dǎo)的OB凋亡。
　　(4)染鋁組OB Bid mRNA及蛋白表達(dá)水平、tBid的蛋白表達(dá)水平、Caspase-3 mRNA表達(dá)量及活性均極顯著高于CG(P＜0.01)，說(shuō)明AlCl3