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文檔簡介
1、KCNQ1和KCNE1以4:2的比例共同構(gòu)成異源多聚體KCNQ1/KCNE1鉀通道。該通道的輔助亞基KCNE1對功能亞基KCNQ1具有顯著的調(diào)節(jié)效應(yīng)。目前已知,KCNQ1單獨表達時所形成的鉀通道具有快激活、慢去活、部分失活的特征;而KCNE1單獨表達不能形成通道;當二者共表達時,由于KCNE1與KCNQ1相互作用,使KCNQ1通道電壓依賴性曲線右移,通道的激活減慢,通道的電導(dǎo)增加,失活消除。輔助亞基KCNE1對功能亞基KCNQ1的這種調(diào)
2、節(jié)作用是形成慢激活電壓門控型鉀電流的基礎(chǔ),在心肌細胞動作電位三期復(fù)極化過程中發(fā)揮重要的作用。
研究表明,kcne1基因突變可引起遺傳性長Q-T間期綜合癥的第五型(LQT5)。位于kcne1不同位點的基因突變可影響通道亞基蛋白質(zhì)不同結(jié)構(gòu)域的功能而造成通道功能異常。目前關(guān)于KCNE1不同結(jié)構(gòu)域?qū)CNQ1影響的分子機制仍不完全清楚。本課題擬對KCNE1不同結(jié)構(gòu)域?qū)CNQ1通道的調(diào)節(jié)作用作初步探討,從而為進一步揭示KCNE1不
3、同結(jié)構(gòu)域?qū)CNQ1通道的影響的分子機制奠定基礎(chǔ)。
我們利用分子克隆、PCR等技術(shù)構(gòu)建了KCNE1不同片段缺失突變體:KCNE1-△C(胞內(nèi)C端缺失);KCNE1-△N(胞外N端缺失);KCNE1-△(N+T)(胞外區(qū)-跨膜區(qū)缺失),并將這三種突變及野生型KCEN1分別與KCNQ1在HEK293細胞中進行一過性表達。運用全細胞膜片鉗技術(shù),我們以電流密度、標準化Ⅰ-V曲線及通道激活/失活時間常數(shù)τ值等電生理參數(shù)為指標,分別對
4、KCNE1不同結(jié)構(gòu)域?qū)CNQ1通道的調(diào)節(jié)作用進行初步研究。
結(jié)果分析表明:與對照組野生型KCNQ1/KCNE1通道相比,這三種突變體都不同程度的導(dǎo)致了通道電流幅度減小、電流密度下降。此外,KCNQ1/KCNE1-△C通道的電壓依賴性激活和去激活時間常數(shù)τ值較對照組明顯降低,KCNQ1/KCNE1-△N通道的電壓依賴性曲線較對照組明顯左移,這一結(jié)果提示KCNE1的胞內(nèi)C端可能與KCNQ1/KCNE1的通道門控動力學(xué)有關(guān),而
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