PLSCR1與HBV相互作用結(jié)構(gòu)域的篩選.pdf

1、乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)屬嗜肝DNA病毒科,是已知感染人類的最小DNA病毒。HBV感染不僅可以引起急、慢性肝炎,而且還與肝硬化、肝癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。
　　根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道,乙肝病毒表面抗原所含LS蛋白是導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷、死亡和纖維化病變的主要原因。一些宿主蛋白與LS有相互作用,能夠抑制乙肝病毒的感染、復(fù)制。
　　PLSCR1(磷脂爬行酶1,phospholipid scramblase1)屬

2、于Ca2+結(jié)合的棕櫚化Ⅱ型膜蛋白,非棕櫚化的PLSCR1蛋白可定位于細(xì)胞核內(nèi),并與基因組DNA序列結(jié)合。PLSCR1蛋白廣泛分布于細(xì)胞膜與細(xì)胞核中,參與了細(xì)胞的分化增殖,并且與信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān)聯(lián)。最初文獻(xiàn)報(bào)道該蛋白有抗白血病作用[25]。在本實(shí)驗(yàn)前期工作中,通過應(yīng)用Far-westen-2D結(jié)合質(zhì)譜鑒定技術(shù),從正常人肝細(xì)胞中篩選乙肝表面抗原相互作用蛋白,共獲得了15個(gè)候選蛋白分子。磷脂爬行酶1(Phospholipid scramblas

3、e1,PLSCR1)為上述實(shí)驗(yàn)篩選出的一個(gè)蛋白分子,與乙型肝炎病毒表面抗原(surface HBV antigens,HBsAg)有相互作用,繼而通過酵母雙雜交技術(shù)驗(yàn)證其有體外抑制HBV的作用。
　　本論文通過構(gòu)建PLSCR1的分段真核表達(dá)載體,并和帶有myc抗體標(biāo)簽的乙肝病毒打蛋白(LS蛋白)共表達(dá)于細(xì)胞中,采用免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)篩選PLSCR1和HBsAg有效結(jié)構(gòu)域。另外,通過酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(enzyme linked immu

4、no-sorbent assay,ELISA)驗(yàn)證了PLSCR1各片段對(duì)HBsAg的抑制作用。結(jié)果顯示,部分PLSCR1片段對(duì)HBV的抑制作用比PLSCR1全長(zhǎng)更顯著,部分片段表現(xiàn)為促進(jìn)宿主細(xì)胞中HBsAg的表達(dá)。其中1-118aa、81-118aa、61-118aa、31-118aa位置片段有抑制乙肝病毒HBsAg的作用;1-80aa、1-60aa、1-30aa片段有促進(jìn)HBsAg分泌的作用。
　　綜上所述,本研究選取人體組織中