11010.篩選并鑒定果蠅jumeau相互作用的蛋白質(zhì)

1、學(xué)校代碼：10225學(xué)號：S14554學(xué)位論文篩選并鑒定果蠅Jumeau相互作用的蛋白質(zhì)指導(dǎo)教師姓名：申請學(xué)位級別：論文提交日期：授予學(xué)位單位：張晴金麗華教授碩士2014年4月東北林業(yè)大學(xué)東北林業(yè)大學(xué)學(xué)科專業(yè)：遺傳學(xué)論文答辯日期：2014年6月授予學(xué)位日期：答辯委員會主席：論文評閱人：春ac4t匕q摘要摘要果蠅作為一種典型的模式生物，在昆蟲和人類的天然免疫研究中一直占有重要的地位?，F(xiàn)今，許多關(guān)于天然免疫的研究結(jié)果都是從對果蠅的研究中發(fā)現(xiàn)

2、的。果蠅Schneider2(s2)細(xì)胞株來自黑腹果蠅培養(yǎng)末期的胚胎，其許多特征顯示與果蠅巨噬細(xì)胞類似。果蠅S2細(xì)胞的培養(yǎng)簡單、高效，且同時具有哺乳動物表達(dá)系統(tǒng)和昆蟲表達(dá)系統(tǒng)二者的優(yōu)良特征，是一個高效率的表達(dá)系統(tǒng)。Jumeau(Jumu)蛋白是果蠅體內(nèi)的一個重要的轉(zhuǎn)錄因子，編碼719個氨基酸，是首個被發(fā)現(xiàn)的具有雙重功能的FKH／WH家族蛋白，能引起異染色質(zhì)的大規(guī)模修飾。但是目前Jumu蛋白在果蠅天然免疫中的作用及轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制還不十分明確

3、。本實(shí)驗(yàn)以LGiot及KCtGuruharsha等人的研究結(jié)果一果蠅Jumu蛋白與Cos、CG5375及L(1)SC之間存在潛在的蛋白相互作用一為基礎(chǔ)。通過構(gòu)建以GFP蛋白為標(biāo)簽的重組質(zhì)粒，制備高效率的GFP多克降抗體，利用果蠅S2細(xì)胞系蛋白表達(dá)系統(tǒng)，蛋白免疫共沉淀技術(shù)來驗(yàn)證Cos、CG5375及L(1)sc與Jumu的相互作用。結(jié)果顯示，果蠅Jumll蛋白與Cos、CG5375及L(1)sc蛋白之間不存在相互作用。為此，我們通過轉(zhuǎn)染空

4、載體pMK33一Flag作為陰性對照和pMK33FlagJumufulllength重組質(zhì)粒到果蠅S2細(xì)胞中并篩選穩(wěn)定的細(xì)胞表達(dá)體系，利用蛋白免疫共沉淀技術(shù)結(jié)合雙向電泳實(shí)驗(yàn)篩選與Jurau蛋白相互作用的蛋白。通過相關(guān)軟件對雙向電泳凝膠圖像分析，共篩選出7個差異蛋白，其相對分予量分別為141KDa，82KDa，69KDa，44KDa，38KDa，27KDa和26KDa。根據(jù)以上篩選結(jié)果，我們對這些差異樣品點(diǎn)進(jìn)行摳點(diǎn)處理并消化，迸行質(zhì)譜分析