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文檔簡介
1、蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)之間的相互作用生物調(diào)控的基本單元，對于理解生命活動機制具有重要意義，是后基因組時代生命科學研究的熱點。 Sos恢復系統(tǒng)利用蛋白質(zhì)在細胞質(zhì)中發(fā)生相互作用，從而激活Ras通路，刺激細胞生長。對于有些傳統(tǒng)的酵母雙雜交技術(shù)并不能檢測的相互作用，Sos恢復系統(tǒng)卻能靈敏的檢測。 本研究用誘餌表達載體(pSos-GFP)克隆了23個成人肝臟蛋白質(zhì)的ORF，并借助CytoTrap雙雜交系統(tǒng)—一種Sos恢復系統(tǒng)，用其中的
2、7個誘餌篩選人類肝臟質(zhì)粒表達文庫。本文的主要內(nèi)容有： 1.構(gòu)建誘餌表達載體(pSos-GFP)：誘變pSos上的BglⅡ，NotⅠ位點，同時在MCS上引入一個GFP表達盒；為了與實驗室已有的經(jīng)典酵母雙雜交系統(tǒng)的載體(pDBLEU-GFP)兼容，在GFP表達盒兩端引入與pDBLEU-GFP克隆方式相同的酶切位點(BglⅡ，NotⅠ)和同源區(qū)；同時確保外源基因與Sos蛋白的C末端相融合。 2.用無酶克隆方式構(gòu)建了23個誘
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