大腸桿菌O157：H7的分子鑒定及其eae基因克隆與表達.pdf

1、浙江大學碩士學位論文大腸桿菌O157：H7的分子鑒定及其eae基因克隆與表達姓名：賀曉龍申請學位級別：碩士專業(yè)：預防獸醫(yī)學指導教師：方維煥20050501浙江大學碩士學位論文摘要WHO不久前指出在過去的20年里，世界上出現(xiàn)了約30種新的傳染病，1982年美國首次報告的由大腸埃希氏菌0157：H7引起的出血性腸炎就是其中之一。已失H0157：H7是一種以食物為主要傳播途徑的人畜共患病原菌，各種肉類、牛奶、蔬菜等均可成為傳播媒介。其對人的致

2、病力特別強，每次攝入103—104個菌就會發(fā)病，現(xiàn)已引起世界高度關注。未能及時做出病原學診斷，缺乏有效的防控手段，是導致該菌流行的重要原因。鑒此，建立敏感而特異的檢測方法，用于臨床診斷、食品檢驗和流行病學調(diào)查十分必要。本試驗根據(jù)大腸桿菌0157：H7O抗原基因簇中特異基因WZX及鞭毛特異編碼基因flic的保守序列設計2對引物，建立并優(yōu)化了檢測大腸桿菌0157：H7的特異性二重PCR體系。在人工培養(yǎng)基中大腸桿菌0157：H7的檢測下限為3

3、102cfu／ml，大腸桿菌0157：H7人工污染牛乳、豬肉及牛肉的最低檢測下限分別為58x102cfu／ml、431Ccfu／g和31103cfu／g，樣品經(jīng)3h預增菌后檢測下限則均可達到4100cfu／ml(g)。試驗結(jié)果提示：針對WgX及∥fc基因的二重PCR方法可以快速特異地檢測出牛乳、豬肉及牛肉等動物性食品中大腸桿菌0157：H7的污染。盡管大腸桿菌0157：H7高致病力的機制尚未明了，但已知緊密素(intimin)是該菌的重