豬細(xì)小病毒和偽狂犬病毒二聯(lián)（價(jià)）疫苗的研究.pdf

1、華中農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文豬細(xì)小病毒和偽狂犬病毒二聯(lián)（價(jià)）疫苗的研究姓名：呂建強(qiáng)申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：動(dòng)物遺傳育種與繁殖指導(dǎo)教師：陳煥春;熊遠(yuǎn)著20031101豬細(xì)小瘸毒拳} 偽狂犬病毒二聯(lián)( 價(jià)) 疫苗} | 勺研究后利用V P 2 基因兩端的B a m HI 位點(diǎn)，構(gòu)建重組轉(zhuǎn)移載體p U S K - V P 2 ，同時(shí)提取親本株P(guān) R V E aT K ’／g G - ／L a c Z + 的基因組D N A ，將它們共轉(zhuǎn)染P K

2、—1 5 細(xì)胞，通過同源重組獲得了重組偽狂犬病毒T K V g G - ／V P 2 + 株。對(duì)該重組病毒進(jìn)行生物學(xué)特性的鑒定，發(fā)現(xiàn)豬細(xì)小病毒V P 2 基因已重組到P R V 基因組中，而且遺傳穩(wěn)定性良好，表達(dá)的豬細(xì)小病毒V P ：蛋自主要分布于細(xì)胞核內(nèi)，其依然可以形成瘸毒樣顆粒，與完整豬細(xì)小病毒粒子一樣呈品格狀排列。進(jìn)而利用該重組病毒制備了豬細(xì)小病霉一偽狂犬病毒基因工程二價(jià)疫苗，動(dòng)物試驗(yàn)表明，其對(duì)小鼠和豬的安全性良好，而且免疫豬可以

3、同時(shí)產(chǎn)生針對(duì)P P V 和P R V 的體液免疫反應(yīng)，產(chǎn)生的抗體水平略低于各自單苗的，但是可以滿足臨床應(yīng)用的要求。該疫苗不僅能達(dá)到一針防兩病的目的，而且可以作為預(yù)防這兩種疾病的標(biāo)記疫苗。此外，本研究對(duì)豬細(xì)小病毒形態(tài)發(fā)生、結(jié)構(gòu)與功能的研究、新型疫苗的研制等均具有重大意義。3 ．豬細(xì)小病毒N S 】基因在桿狀病毒中的表達(dá)利用P C R 方法擴(kuò)增豬細(xì)小病毒N S I 基因，將其克隆到p M D l 8 ，T 載體中，測(cè)定序列后與G e n B

4、 a n k 中登錄的P P V N S ?；蜻M(jìn)行比較，證實(shí)?；蛟谪i細(xì)小病毒中高度保守。然后構(gòu)建桿狀病毒重組轉(zhuǎn)移載體p F a s t - N S I ，轉(zhuǎn)化D H , o B a c 大腸桿菌得到重組穿梭載體B a c m i d —N S I ，轉(zhuǎn)染S f 9 昆蟲細(xì)胞后獲得了重組桿狀病毒A c N P V ．N S l 。該重組桿狀病毒成功地表達(dá)了豬細(xì)小病毒N S I 蛋白，并且只能與感染豬細(xì)小病毒的豬的抗血清發(fā)生特異性免疫反