豬偽狂犬病毒引起的細(xì)胞自噬和凋亡的初步研究.pdf

1、豬偽狂犬病毒(Pseudorabies virus，PRV)屬于皰疹病毒科、皰疹病毒屬，又被稱為豬皰疹病毒1型，可以引起多種家畜和野生動物感染發(fā)生偽狂犬病，給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失。
　　細(xì)胞自噬能夠通過自我消化細(xì)胞成分的方法調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)合成和蛋白質(zhì)降解之間的平衡。細(xì)胞凋亡在生物體進(jìn)化、維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定以及在多個(gè)系統(tǒng)的發(fā)育中起著重要的作用。細(xì)胞自噬與凋亡是引起細(xì)胞程序性死亡的主要途徑，二者共同決定了細(xì)胞在受到病原入侵時(shí)的命運(yùn)，因此自

2、噬和凋亡之間的平衡對病毒的復(fù)制周期的實(shí)現(xiàn)和致病性有著至關(guān)重要的影響。自噬和凋亡具有部分通用的上游信號途徑，有時(shí)可能會導(dǎo)致自噬和凋亡的共同發(fā)生;同時(shí)，細(xì)胞可以在自噬和凋亡之間互相轉(zhuǎn)化。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明PRV感染對細(xì)胞自噬反應(yīng)有雙重影響，在感染早期階段，PRV能夠誘導(dǎo)細(xì)胞自噬;隨著病毒蛋白的表達(dá)，細(xì)胞自噬反應(yīng)被抑制。通過流式細(xì)胞檢測技術(shù)和Western blot分析發(fā)現(xiàn)PRV能夠誘導(dǎo)Vero細(xì)胞發(fā)生caspase依賴性細(xì)胞凋亡。本實(shí)驗(yàn)通過化學(xué)

3、抑制劑和誘導(dǎo)劑調(diào)節(jié)PRV引起的細(xì)胞自噬或凋亡，研究表明，在自噬體形成階段誘導(dǎo)細(xì)胞自噬能夠抑制細(xì)胞凋亡;在自噬體形成階段抑制細(xì)胞自噬能夠誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡;抑制自噬體與溶酶體融合后的降解能夠促進(jìn)細(xì)胞凋亡;用Caspase-3抑制劑抑制細(xì)胞凋亡后，自噬相關(guān)蛋白LC3-Ⅰ至LC3-Ⅱ的轉(zhuǎn)化和SQSTM1/P62的降解增多。以上結(jié)果表明PRV引起的細(xì)胞自噬和凋亡作用拮抗。自噬與凋亡的相互關(guān)系能夠影響PRV的復(fù)制，自噬增多或者自噬體與溶酶體融合后的降解

4、被抑制均能抑制病毒的復(fù)制。
　　已有研究表明PRV早期蛋白US3能夠通過活化PI3 K/AKT途徑抑制細(xì)胞凋亡，為了確定US3能否通過該途徑對細(xì)胞自噬產(chǎn)生影響，本實(shí)驗(yàn)通過PI3K、AKT抑制劑處理感染PRV的細(xì)胞后，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞自噬增多。在感染HeN1病毒株的細(xì)胞中轉(zhuǎn)染US3質(zhì)粒，與對照細(xì)胞相比，轉(zhuǎn)染US3質(zhì)粒后AKT的磷酸化增多，細(xì)胞自噬被抑制;分別用△US3 HeN1病毒株和HeN1病毒株感染Vero細(xì)胞，研究表明感染△US3 H