1α,25-(OH)2D3對破骨細(xì)胞生成和活力的影響.pdf

1、骨組織不斷更新,保持生命活力主要依靠骨代謝平衡,此平衡一旦被打破即可導(dǎo)致各種代謝性骨病。動物骨營養(yǎng)不良性疾病主要是由于破骨細(xì)胞(osteo clasts,OC)引起的骨吸收大于成骨細(xì)胞(osteo blasts,OB)引起的骨生成而引起。其中,OC的形成及吸收活性主要受核因子κB受體活化因子配體(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)調(diào)控。目前研究發(fā)現(xiàn),1α,25-(OH)2D3不僅能宏觀上調(diào)

2、節(jié)動物對鈣、磷的吸收,還能直接作用于成骨細(xì)胞,通過RANKL/RANK/OPG系統(tǒng)調(diào)節(jié)骨代謝,亦有認(rèn)為1α,25-(OH)2D3能直接作用于OC,但報道很少。RANKL的表達(dá)和分泌誘導(dǎo)單核巨噬細(xì)胞形成OC。因此進(jìn)一步理解維生素D對骨細(xì)胞調(diào)節(jié)的確切機(jī)制有助于更好地防治代謝性骨病。
　　 本文以破骨細(xì)胞前體細(xì)胞RAW264.7小鼠單核巨噬細(xì)胞株作為研究對象,探討了不同培養(yǎng)條件方法對細(xì)胞生物學(xué)特性的影響。并在此基礎(chǔ)上研究了不同濃度RA

3、NKL(25、50、100ng/ml)、1α,25-(OH)2D3(1×10-9、1×10-8、1×10-7mol/L)對細(xì)胞增殖的影響,以及1α,25-(OH)2D3對RAW264.7細(xì)胞分化形成OC及對骨吸收活力的影響,為1α,25-(OH)2D3治療骨代謝性疾病提供理論性的依據(jù)。取得如下結(jié)果:
　　 (1)優(yōu)化了RAW264.7細(xì)胞培養(yǎng)方法。傳統(tǒng)消化法約需10～15min才能使細(xì)胞消化下來,而改良的消化方法只需3～5 mi

4、n就可以使細(xì)胞消化下來,降低了胰酶對細(xì)胞的損傷。改良方法中細(xì)胞貼壁快,形態(tài)良好,增殖迅速。慢速凍存法復(fù)蘇后細(xì)胞的成活率(88.7％)極顯著高于快速凍存法(81.8％)(P＜0.01)。說明兩次胰酶消化法及慢速凍存法更適合RAW264.7細(xì)胞生長,細(xì)胞狀態(tài)良好。
　　 (2)不同濃度的RANKL均可抑制RAW264.7細(xì)胞增殖,且隨著濃度增加,抑制作用增強(qiáng)。培養(yǎng)3d,100 ng/ml RANKL組細(xì)胞增殖率極顯著低于對照組(P＜

5、0.01)。培養(yǎng)4d時,50及100 ng/ml RANKL組細(xì)胞增殖率均極顯著低于對照組(P＜0.01),并且TRAP陽性多核OC數(shù)極顯著多于對照組和25ng/ml RANKL組(P＜0.01),各濃度RANKL組象牙片均出現(xiàn)明顯吸收陷窩。各濃度1α,25-(OH)2D3均促進(jìn)RAW264.7細(xì)胞增殖,且隨1α,25-(OH)2D3濃度增加,促進(jìn)作用增強(qiáng)。培養(yǎng)3d,1×10-9、1×10-8、1×10-7mol/L1α,25-(OH)