1,25(OH)2D3對(duì)2型糖尿病伴牙周炎患者中性粒細(xì)胞相關(guān)功能的影響.pdf

1、目的：研究1,25(OH)2D3對(duì)2型糖尿病伴牙周炎患者中性粒細(xì)胞趨化、凋亡等功能的影響，以期為2型糖尿病合并牙周炎的發(fā)生、發(fā)展及臨床治療提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　1.嚴(yán)格按照2型糖尿病合并牙周炎的納入標(biāo)準(zhǔn)選擇44例患者作為研究對(duì)象。實(shí)驗(yàn)分為1,25(OH)2D3未干預(yù)組和1,25(OH)2D3干預(yù)組，按其作用濃度的不同又分為以下三組：10-6 mol/L、10-8 mol/L、10-10 mol/L干預(yù)組。

2、r>　　2.采用密度梯度離心法分離2型糖尿病伴牙周炎患者外周血中性粒細(xì)胞（Polymorphonuclear leukocytes, PMN），瑞氏-姬姆薩染色及臺(tái)盼藍(lán)拒染實(shí)驗(yàn)分別鑒定細(xì)胞純度和檢測(cè)細(xì)胞活力。
　　3.采用不同濃度1,25(OH)2D3作用于PMN24h后，分別運(yùn)用Transwell系統(tǒng)檢測(cè)PMN趨化、遷移能力；流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測(cè)PMN凋亡率及細(xì)胞內(nèi)活性氧（Reactive oxygen species，RO

3、S）的生成量；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)上清液中腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）、中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶（NE）的含量變化。
　　結(jié)果：
　　1.成功分離2型糖尿病伴牙周炎患者外周血PMN，瑞氏-姬姆薩染色示細(xì)胞純度≥96％，臺(tái)盼藍(lán)染色示細(xì)胞活力＞98％。
　　2.不同濃度1,25(OH)2D3作用于 PMN24h，趨化劑甲酰甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸（f

4、MLP）趨化2h后發(fā)現(xiàn)，與1,25(OH)2D3未干預(yù)組相比，10-6 mol/L、10-8 mol/L1,25(OH)2D3干預(yù)組PMN趨化功能增強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而10-10 mol/L1,25(OH)2D3干預(yù)組與1,25(OH)2D3未干預(yù)組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。10-6mol/L、10-8 mol/L、10-10 mol/L干預(yù)組兩兩比較發(fā)現(xiàn)，10-6 mol/L干預(yù)組＞10-8 mol/

5、L干預(yù)組＞10-10 mol/L干預(yù)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　3.不同濃度1,25(OH)2D3作用于PMN24h后，流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測(cè)PMN凋亡率及細(xì)胞內(nèi) ROS生成量的結(jié)果顯示，與1,25(OH)2D3未干預(yù)組相比，1,25(OH)2D3干預(yù)組 PMN凋亡率均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P<0.05）。1,25(OH)2D3干預(yù)組兩兩比較發(fā)現(xiàn)，10-8 mol/L干預(yù)組＞10-6 mol/L干預(yù)組＞10-

6、10 mol/L干預(yù)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P<0.05）；細(xì)胞內(nèi) ROS的檢測(cè)顯示，與1,25(OH)2D3未干預(yù)組相比10-6 mol/L1,25(OH)2D3干預(yù)組ROS的生成量增加，10-8 mol/L、10-10 mol/L1,25(OH)2D3干預(yù)組ROS的生成量減少，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　4. ELISA檢測(cè) PMN上清液中 TNF-α、IL-1β、IL-6、NE的結(jié)果顯示，1,25(OH)2D3

7、干預(yù)組TNF-α、IL-1β、IL-6、NE的水平均較未干預(yù)組低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。1,25(OH)2D3干預(yù)組兩兩比較發(fā)現(xiàn)，10-8 mol/L干預(yù)組＜10-6 mol/L干預(yù)組，10-8 mol/L干預(yù)組＜10-10 mol/L干預(yù)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而10-6 mol/L干預(yù)組與10-10 mol/L干預(yù)組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.10-6 mol/

8、L、10-8 mol/L1,25(OH)2D3可能對(duì)2型糖尿病伴牙周炎患者外周血PMN趨化有促進(jìn)作用，且10-6mol/L1,25(OH)2D3作用較顯著；
　　2.三種不同濃度的1,25(OH)2D3可能對(duì)2型糖尿病伴牙周炎患者外周血PMN凋亡均有促進(jìn)作用，且濃度為10-8 mol/L時(shí)作用較為顯著；
　　3.1,25(OH)2D3可能會(huì)影響2型糖尿病伴牙周炎患者外周血PMN ROS的生成量，10-6mol/L干預(yù)組ROS

9、的生成量增加，而10-8 mol/L、10-10 mol/L干預(yù)組ROS的生成量減少，且10-8 mol/L干預(yù)組減少量較顯著；
　　4.一定濃度的1,25(OH)2D3可能對(duì)2型糖尿病伴牙周炎患者外周血PMN相關(guān)炎性因子的表達(dá)有抑制作用，且以10-8 mol/L1,25(OH)2D3抑制作用最為顯著。
　　以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明一定濃度的1,25(OH)2D3對(duì)2型糖尿病伴牙周炎患者外周血PMN的趨化、凋亡等功能均有一定影響。由