高梁中一個DREB類轉(zhuǎn)錄因子基因的克隆.pdf

1、干旱、鹽堿和凍害等非生物逆境嚴重影響了植物的生長發(fā)育。在逆境脅迫下,植物可以啟動或增強兩類基因的表達來抵御不利環(huán)境的危害：⑴基因編碼的產(chǎn)物包括傳遞信號和調(diào)控基因表達的轉(zhuǎn)錄因子,如bZIP轉(zhuǎn)錄因子、MYC轉(zhuǎn)錄因子、MYB轉(zhuǎn)錄因子及DREB轉(zhuǎn)錄因子等；感應(yīng)和轉(zhuǎn)導(dǎo)脅迫信號的蛋白激酶(如MAP激酶、核糖體蛋白激酶和轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白激酶等)；以及在信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中起重要作用的蛋白酶(如磷酸醋酶、磷脂酶C等)。⑵基因編碼的產(chǎn)物包括一些功能蛋白和酶類,如LEA

2、蛋白、水通道蛋白、脯氨酸合成酶等,使細胞各種生理生化代謝活動能維持正常進行。由于植物基因的表達調(diào)控大多發(fā)生在轉(zhuǎn)錄水平上,主要受控于順式作用元件和反式作用因子。尤其是轉(zhuǎn)錄因子基因的表達可提高其下游一系列抗逆功能基因的表達水平,從而提高植物的綜合抗逆性,在抗逆轉(zhuǎn)基因育種中具有重要功能價值。因此,分離和篩選鑒定優(yōu)異的轉(zhuǎn)錄因子基因是當前抗逆分子生物學(xué)研究的重點。
　　 本研究以不同基因型高粱為材料,利用簡并引物和RACE技術(shù)及RT-PC

3、R研究了一個高梁中由高鹽誘導(dǎo)的DREB類轉(zhuǎn)錄因子基因。首先根據(jù)GenBank中多種植物AP2／EREBP轉(zhuǎn)錄因子氨基酸序列的保守區(qū)段設(shè)計了一對簡并引物,通過RT-PCR擴增出一條117 bp的cDNA片段。經(jīng)Blast比較及測序驗證其正確性后,根據(jù)此片段序列設(shè)計3’端特異性引物,利用3’RACE得到949bp的3’端cDNA片段,命名為SbDREB1001,并對其進行了相關(guān)的生物信息學(xué)分析。該序列包括789bp的開放閱讀框,編碼262個

4、氨基酸,該肽段分子量為28.6 kDa,理論等電點為5.52。生物信息學(xué)分析顯示該基因具有C端疏水區(qū),并且它的蛋白序列在第83～138氨基酸處包含一個保守的AP2結(jié)構(gòu)域。DREB氨基酸序列與其他植物DREB類基因有很高的同源性,其序列經(jīng)Blast軟件進行同源性分析,表明與已知的植物DREB基因的序列具有很高的同源性,該基因與玉米的一個DREB類基因(No.:NM-001158997.1)同源性高達88％。利用實時定量PCR技術(shù),分析了該