甘藍枯萎病菌中一個新致病基因的克隆與功能驗證.pdf

1、CloningandFunctionalVerificationofaNovelPathogenicityGeneinFusariumoxysporumfspcong／utinansThesissubmittedtoQingdaoAgriculturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofAgronomyFengJianhai(Departmentof

2、AgronomyandPlantProtection)Supervisor：AssociateProfessorHuangJinguang，ProfessorLiXinghongQingdaoChinaJune，2013摘要由尖孢鐮刀菌粘團專化型(Fusariumoxyzporumfspconglutinan)l起的甘藍枯萎病是一種世界性分布的土傳病害，該病發(fā)生地區(qū)導(dǎo)致甘藍年均損失2030％，嚴重時可能絕產(chǎn)。目前，甘藍枯萎病菌的生物學特

3、征與侵染過程較為明析，但對甘藍枯萎病菌分子機理的研究較為匱乏。因此，本研究從甘藍枯萎病菌致病力衰減突變體入手，分離鑒定甘藍枯萎病菌致病相關(guān)基因，為從分子水平解析該病原菌的致病機理提供了一定基礎(chǔ)。作者首先通過對限制性內(nèi)切酶的種類及酶量對甘藍枯萎病菌REMI(RestrictionEnzymeMediateIntergration)轉(zhuǎn)化體系進行優(yōu)化，建立了高效的REMI轉(zhuǎn)化體系。采用ttindIII和EcoR1分別線性化的pUCATPH轉(zhuǎn)化

4、了Fusariumoxysporumfspconglutinans野生型菌株A6，累計獲得了1056株轉(zhuǎn)化子。對上述轉(zhuǎn)化子庫進行了陽性率、插入位點數(shù)、表型突變率等方面進行了評估，且獲得了6個生長速率減慢的突變體、8個產(chǎn)孢量減少和4個產(chǎn)孢量增多的突變體。另外，通過質(zhì)粒拯救技術(shù)獲得了3個生長速率減慢突變體的側(cè)翼系列。利用兼并引物獲得了突變體F40甘藍枯萎病菌中的候選基因FOCI區(qū)域序列。通過基因敲除技術(shù)獲得了上述基因的3個敲除體，敲除體表型