灰葡萄孢BC1G_08931基因的功能研究.pdf

1、灰葡萄孢(Botrytis cinerea)所引起的灰霉病是一種世界性分布的重要植物病害，灰葡萄孢菌的寄主范圍非常廣泛，可侵染多種經(jīng)濟(jì)作物和觀賞植物，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失?；颐共〉姆乐问寝r(nóng)業(yè)生產(chǎn)上的難題之一，目前主要依賴化學(xué)農(nóng)藥。從分子水平上探究灰葡萄孢菌的致病和發(fā)育等機(jī)理可為灰霉病的防治奠定基礎(chǔ)，本研究主要是利用基因沉默和超表達(dá)技術(shù)對(duì)BCIG08931的基因功能進(jìn)行了初步研究，取得了如下研究結(jié)果：
　　 1、以本實(shí)驗(yàn)室核盤菌表達(dá)

2、譜為基礎(chǔ)篩選出核盤菌SSIG_11468基因的同源基因BCIG_08931，該開(kāi)放閱讀框含有829bp，含有2個(gè)外顯子，1個(gè)內(nèi)含子。其cDNA序列全長(zhǎng)741bp，編碼246個(gè)氨基酸，軟件預(yù)測(cè)顯示編碼蛋白有信號(hào)肽并具有DUF3129和DUF3988兩個(gè)的未知功能的保守結(jié)構(gòu)域。RT-PCR結(jié)果表明該基因在菌絲的生長(zhǎng)階段表達(dá)量較高，后期菌絲出現(xiàn)白色糾結(jié)時(shí)表達(dá)量開(kāi)始有所下降，至形成菌核時(shí)表達(dá)量最低，結(jié)果說(shuō)明該基因可能參與了灰葡萄孢的菌核形成過(guò)程

3、。
　　 2、分別構(gòu)建了該基因的超表達(dá)載體和沉默載體，并通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化出發(fā)菌株CanBC-3V得到了147個(gè)沉默轉(zhuǎn)化子和89個(gè)超表達(dá)轉(zhuǎn)化子，并通過(guò)PCR進(jìn)行了驗(yàn)證。RT-PCR結(jié)果表明，與出發(fā)菌株CanBC-3V相比，大部分的沉默/超表達(dá)轉(zhuǎn)化子中BC1G_08931基因的表達(dá)量均有所改變，選取表達(dá)量差異明顯的3個(gè)沉默轉(zhuǎn)化子和2超表達(dá)轉(zhuǎn)化子，通過(guò)Real-time PCR定量分析進(jìn)一步進(jìn)行了表達(dá)驗(yàn)證。
　　 3、研究表

4、明沉默或超表達(dá)BC1G_08931基因?qū)移咸焰叩木z和孢子形態(tài)無(wú)明顯影響，但沉默轉(zhuǎn)化子在產(chǎn)酸能力、菌絲生長(zhǎng)速度、致病力和生物學(xué)產(chǎn)量方面均有不同程度的下降，而超表達(dá)轉(zhuǎn)化子在以上四個(gè)方面均有不同程度的升高，證實(shí)了BC1G_08931基因與這些生物學(xué)表型的相關(guān)性。沉默轉(zhuǎn)化子產(chǎn)菌核數(shù)目增多，菌核有所變小，而超表達(dá)轉(zhuǎn)化子則表現(xiàn)為數(shù)目減少，體積增大，結(jié)果說(shuō)明BC1G_08931基因與菌核形成能力相關(guān)。
　　 4、在不同溫度下和不同碳源培養(yǎng)