生物科學(xué)畢業(yè)論文高效液相色譜質(zhì)譜法檢測出口水產(chǎn)品中沙星含量的研究

1、<p><b>　　本科畢業(yè)論文</b></p><p><b>　?。?0 屆）</b></p><p>　　高效液相色譜質(zhì)譜法檢測出口水產(chǎn)品中沙星含量的研究</p><p>　　所在學(xué)院 </p><p>　　專業(yè)班級

2、 生物科學(xué) </p><p>　　學(xué)生姓名 學(xué)號 </p><p>　　指導(dǎo)教師 職稱 </p><p>　　完成日期 年 月 </p><p><b>　　目錄<

3、/b></p><p><b>　　中文摘要I</b></p><p><b>　　英文摘要II</b></p><p><b>　　引 言1</b></p><p><b>　　1 材料與方法3</b></p><p&g

4、t;<b>　　1.1 材料3</b></p><p>　　1.2 儀器藥品3</p><p>　　1.2.1 儀器3</p><p>　　1.2.2 藥品3</p><p>　　1.3 實(shí)驗(yàn)方法3</p><p>　　1.4 HPLC-MS /MS條件4</p><

5、;p>　　1.4.1 色譜條件4</p><p>　　1.4.2 質(zhì)譜條件4</p><p>　　1.5 實(shí)驗(yàn)步驟4</p><p>　　1.5.1 取樣4</p><p>　　1.5.2 提取4</p><p>　　1.5.3 過柱純化5</p><p>　　1.5.4 氮吹

6、5</p><p>　　1.5.5 上樣5</p><p>　　2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析6</p><p>　　2.1 數(shù)據(jù)分析6</p><p>　　2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線7</p><p>　　2.3 回收率、精確度7</p><p>　　3 實(shí)驗(yàn)討論與總結(jié)9</p><

7、;p>　　3.1 液質(zhì)聯(lián)用法流動相的選擇9</p><p>　　3.2 提取劑的選擇9</p><p>　　3.3 提取酸度對提取效率的影響9</p><p>　　3.4 濃縮方式對結(jié)果的影響9</p><p>　　3.5 樣品基質(zhì)效應(yīng)的消除9</p><p>　　3.6 方法的專一性10</p

8、><p><b>　　3.7 應(yīng)用15</b></p><p>　　3.8 沙星類藥物存在問題及建議15</p><p><b>　　小結(jié)16</b></p><p><b>　　參考文獻(xiàn)17</b></p><p>　　附譯文錯誤!未定義書簽。&

9、lt;/p><p><b>　　致 謝26</b></p><p>　　千萬不要刪除行尾的分節(jié)符，此行不會被打印。在目錄上點(diǎn)右鍵“更新域”，然后“更新整個目錄”。</p><p>　　高效液相色譜質(zhì)譜法檢測 出口水產(chǎn)品中沙星含量的研究</p><p>　　[摘要] 建立了

10、動物組織樣品中諾氟沙星、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、氧氟沙星4種喹諾酮類獸藥多殘留量的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。用酸性乙腈萃取樣品中的4種喹諾酮類藥物殘留,以XTerra MS C18 液相色譜柱分離, 在正離子模式下以電噴霧電離串聯(lián)質(zhì)譜進(jìn)行測定。在100ul,200ul,500ul,1000ul,濃度為（100ng/ml），4個加標(biāo)水平下進(jìn)行了驗(yàn)證試驗(yàn), 方法的線性范圍為2～20ug /kg, 平均回收率為79.9%～108.3%, 相

11、對標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.1%～6.2%。該方法簡便、快速、準(zhǔn)確, 各項(xiàng)技術(shù)指標(biāo)滿足國內(nèi)外法規(guī)的要求, 可用于蝦仁和魚肉等水產(chǎn)品組織樣品中喹諾酮類藥物多殘留的確證檢測。</p><p>　　[關(guān)鍵詞] 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法 喹諾酮類藥物殘留 水產(chǎn)品</p><p>　　[Abstract]</p><p>　　[Abstract] A confirmative m

12、ethod was developed with high performance liquid chromatography coupled with electrospray ionization tandem mass spectrom etry ( HPLC-MS/MS) to simultane-ously detect 4 quinolone residues in animal tissues, which include

13、d norfloxacin, profloxacin, enroflox-acin and ofloxacin. In the method, the 4 residues were extracted with acidified acetonitrile. Then the reconstituted sample solution was analyzed using HPLC-MS/MS in positive mode, wi

14、th a XTerra MS C18 column as the </p><p>　　[Key words] high performance liquid chrom atography coupled with electrospray ionization tandem mass spectrom etry (HPLC-MS /MS); quinolone residues; A quatic pr

15、oducts</p><p><b>　　引 言</b></p><p>　　食品安全是當(dāng)今世界人們所關(guān)注的重要問題之一，每年食源性疾病——因食用不安全的食品而致使數(shù)億人患病，并造成人員死亡。食品安全己成為全球公眾優(yōu)先考慮的健康問題。中國政府對食品安全問題己引起了的高度關(guān)注。根據(jù)專家估計(jì)，每年我國實(shí)際發(fā)生食物中毒例數(shù)至少在20～40萬人?！笆濉卑l(fā)展綱要和規(guī)劃中明確提

16、出“加快建立農(nóng)產(chǎn)品市場信息、食品安全和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系”，首次把食品安全體系寫進(jìn)國家發(fā)展規(guī)劃，表明我國政府對食品安全控制工作的決心與信心。影響食品安全的主要因素有物理因素、化學(xué)因素和生物因素的污染，對化學(xué)因素的污染控制近年來一直是發(fā)達(dá)國家控制食品安全的重要工作，特別是從本國利益出發(fā)以歐盟和日本為代表的發(fā)達(dá)國家，不斷提高對獸藥、農(nóng)藥殘留物的限量標(biāo)準(zhǔn)，給我國農(nóng)產(chǎn)品出口帶來巨大的挑戰(zhàn)。</p><p>　　由于受人口數(shù)量、

17、生產(chǎn)力水平和生產(chǎn)方式等因素的影響，我國農(nóng)產(chǎn)品的生產(chǎn)水平與發(fā)達(dá)國家相比仍比較落后，特別是動物疾病控制中濫用抗生素的現(xiàn)象依然十分嚴(yán)重;由于對個體分散的養(yǎng)殖戶的用藥管理和技術(shù)培訓(xùn)還無法到位，在農(nóng)村千家萬戶食用動物分散飼養(yǎng)的狀況依然存在。因此在動物源性產(chǎn)品中檢測出違禁和超標(biāo)抗生素的情況是常有發(fā)生。</p><p>　　沙星是個喹諾酮類大家族，氟喹諾酮類藥物Fluoroquinolones (FQs) 是一類人工合成的廣譜

18、抗菌藥。該類藥物開發(fā)于20 世紀(jì)80年代，由于其抗菌作用強(qiáng)，適于治療呼吸、消化、泌尿、生殖等系統(tǒng)的各種感染癥,廣泛應(yīng)用于動物和水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)。由于是人獸共用藥，除其毒副作用對人體的直接危害外，食品中低濃度的FQs殘留容易誘導(dǎo)致病菌產(chǎn)生耐藥性。喹諾酮類藥物可發(fā)生中、重度光敏反應(yīng)和光毒性反應(yīng), 可致重癥肌無力癥狀加重、呼吸肌無力而危及生命, 且有潛在的致癌性和遺傳毒性,影響了臨床治療效果。近年來，隨著FQs 在食源性動物中的廣泛使用，其殘留問題

19、已引起極大關(guān)注。</p><p>　　恩諾沙星、環(huán)丙沙星、諾氟沙星、氧氟沙星屬喹諾酮類抗菌藥物，臨床廣泛用于泌尿道腸道，呼吸道等各種感染。同樣，在食品中的藥物殘留對人體產(chǎn)生嚴(yán)重的危害，使細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性。因此各國在動物源性食品中對這類藥物允許的最大殘留進(jìn)行了控制，并制訂出相應(yīng)的最高殘留限量: 根據(jù)不同動物品種、組織和藥物種類, 最高殘留限量在10～6000ug/kg之間。特別是日本、歐盟均對喹諾酮類藥物制定了最大允

20、許限量, 但美國等一些國家未允許用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)。日本對該類藥殘的最大殘留限量為0.05mg/kg。最近日本發(fā)出預(yù)警通告，我國出口日本的鰻魚恩諾沙星殘留超過最大殘留限量。我國每年有大量的鰻魚、蝦類等水產(chǎn)品出口日本，在加強(qiáng)用藥管理的同時，要研究這些水產(chǎn)品中該類藥物的檢驗(yàn)方法。我國水產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)評估仍處在初級階段, 新修訂的《食品中農(nóng)藥最大殘留限量標(biāo)準(zhǔn)》 ( GB2763-2005)和《食品中污染物限量》( GB 2762-2005)較大程度地引

21、用了國際食品與法典委員會CAC 標(biāo)準(zhǔn)的風(fēng)險(xiǎn)評估數(shù)據(jù)。</p><p>　　近十多年來，國外獸藥殘留物檢測技術(shù)不斷發(fā)展，檢測限量不斷降低，從一般常規(guī)分析向痕量級分析發(fā)展，檢測技術(shù)從定量到定性方向發(fā)展，以氯霉素為例，在90年代中期，歐洲也以loppb為檢測限量，但到2000年就將檢測限量提高</p><p>　　到O.3pPb檢測技術(shù)的迅猛發(fā)展給我國相關(guān)檢測部門的工作造成極大的壓力，所以適時開

22、展獸藥殘留物檢測技術(shù)的研究，以及這類藥物在主要出口產(chǎn)品中的代謝和消長規(guī)律的研究具有重大的現(xiàn)實(shí)意義。</p><p>　　近年來，HPLC-MS/MS已成為現(xiàn)代分析手段中必不可少的組成部分，是由于高效液相色譜-質(zhì)譜，質(zhì)譜(柳LC-Ms/Ms)聯(lián)用新技術(shù)的不斷出現(xiàn)。20世紀(jì)90年代以來，由于大氣壓電離的成功應(yīng)用以及質(zhì)譜本身的發(fā)展，高交液相色譜與質(zhì)譜的聯(lián)用，特別是與串聯(lián)質(zhì)譜的聯(lián)用得到了極大的發(fā)展和重視。HPLC一MS/

23、M聯(lián)用的優(yōu)點(diǎn)非常顯著，因?yàn)闅庀嗌V只能分離一些易揮發(fā)且不分解的物質(zhì)，而液相色譜則把分離范圍大大拓寬了，生物大分子也能分離，HPLC與高選擇性、高靈敏度的MS/MS結(jié)合，可對復(fù)雜樣品進(jìn)行實(shí)時分析，即使在HPLC難分離的情況下，只要通過MS1及MS2對目標(biāo)化合物進(jìn)行中性碎片掃描，則可發(fā)現(xiàn)并突出混和物中的標(biāo)化合物，顯著提高信噪比。動物性食品中的獸藥殘留量及其他有害成分的含量甚微，往往需要進(jìn)行痕量分析，對分析方法的靈敏度要求較高。而HPLC-M

24、S/MS具有極高的靈敏度，特別適合進(jìn)行痕量分析，可以鑒別和測定各種類型的獸藥殘留物與已成熟的GC-MS聯(lián)用技術(shù)相比較。HPLC-MS/MS所具備的一系列優(yōu)點(diǎn)，雖然HPLC-MS/MS聯(lián)用技術(shù)還處于初期發(fā)展階段，它的應(yīng)用才剛剛起步，但在動物性食品殘留檢測中的應(yīng)用前景</p><p>　　文獻(xiàn)報(bào)道了恩諾沙星和環(huán)丙沙星的檢測方法，多采用液相色譜紫外或熒光檢測，毛細(xì)管電泳法和光度法。水產(chǎn)品中氟喹諾酮類藥物殘留的檢測方法,

25、報(bào)道的有微生物方法和高效薄層色譜(HPTLC) 等初篩方法;高效液相色譜熒光檢測器/ 紫外檢測器測定方法(HPLC - FLD/ DAD/ UV); 高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用(LC - MS ,LC - MSn) 等測定方法。雖然熒光檢測是一種靈敏度高選擇性好的檢測手段，但仍不可避免存在雜質(zhì)干擾，造成誤判，所以我們同時研究多級質(zhì)譜確證的方法，使檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠。高效液相串聯(lián)質(zhì)譜的方法靈敏度高、效果好, 可滿足水產(chǎn)品中喹諾酮類藥物殘留的檢測工

26、作需要。</p><p><b>　　材料與方法</b></p><p><b>　　材料</b></p><p>　　提供到舟山檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)的出口水產(chǎn)品，凍白蝦、海鮮配菜、貽貝肉。</p><p><b>　　儀器藥品</b></p><p><

27、;b>　　儀器</b></p><p>　　稱量瓶、電子天平、容量瓶、錐形瓶、聚丙烯離心管、無蓋玻璃離心管、Universal 320R型 冷凍離心機(jī) :9000轉(zhuǎn)/分、漏斗、Agilent Technologies 1200 Series型氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀、超聲波清洗儀、S23-2 恒溫磁力攪拌機(jī)、超純水儀MiliQ-G 、IKA分散機(jī)（T25 BASIC）、12孔位氮吹儀（N-EVAP

28、111）、隔膜真空泵（GM-1.33A）、Waters Oasis HLB Cartridge、漩渦振蕩器、0. 22μm濾膜、壓蓋器、固相萃取SPE裝置。</p><p><b>　　藥品</b></p><p>　　沙星標(biāo)準(zhǔn)100ng/ml：分別取恩諾沙星，環(huán)丙沙星，諾氟沙星，氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)品10.0mg，用乙腈定容至10mL，濃度為1.0mg/mL ；臨用時用乙腈

29、稀釋至適當(dāng)濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。</p><p>　　1000ml檸檬酸0.1mol/L：21.01g檸檬酸+1L去離子水</p><p>　　625ml磷酸氫二鈉0.2mol/L：28.41g磷酸氫二鈉+1L去離子水</p><p><b>　　乙二胺四乙酸二鈉</b></p><p>　　沙星提取液：1000ml檸檬

30、酸0.1mol/l+625ml磷酸氫二鈉0.2mol/l+60.5g乙二胺四乙酸二鈉，調(diào)PH值4.0后，再加乙二胺溶解，磁力樣旋轉(zhuǎn)（1100r/m,15min)</p><p><b>　　高純氮</b></p><p>　　甲醇:100%(體積分?jǐn)?shù))</p><p>　　甲醇:5%(體積分?jǐn)?shù))</p><p>　　沙星

31、定溶液:0.1%甲酸、乙腈按7:3體積比混合</p><p><b>　　乙酸乙酯</b></p><p><b>　　實(shí)驗(yàn)方法</b></p><p>　　關(guān)于沙星類藥物殘留的檢測方法, 目前多采用杯碟法、高效液相色譜-熒光法( HPLC-FLD)、HPLC-串聯(lián)質(zhì)譜(M S/MS) 等。由于HPLC-MS具有選擇性強(qiáng)、

32、靈敏度高和一次可檢測多種喹諾酮類藥物殘留的優(yōu)點(diǎn), 在喹諾酮類藥物的確證分析中應(yīng)用較多。本文在國內(nèi)外研究的基礎(chǔ)上, 利用HPLC-MS /M S技術(shù), 建立了動物組織</p><p>　　樣品中４種喹諾酮類藥物：諾氟沙星、氧氟沙星、環(huán)丙沙星和恩諾沙星殘留的同時確證分析方法。</p><p>　　HPLC-MS /MS條件</p><p><b>　　色譜條件

33、</b></p><p>　　色譜柱: XTerra MS C18 柱(150mm * 2.1mm Column, 5μm, Waters公司)，柱溫: 20℃，流速: 200 uL/min，進(jìn)樣量: 20L，流動相A為0.1%甲酸溶液，B為甲醇，C為乙腈。</p><p><b>　　質(zhì)譜條件</b></p><p>　　離子源:

34、 電噴霧源( ESI＋)；掃描方式: 多反應(yīng)監(jiān)測(MRM), 正離子模式；離子源溫度: 490 ；霧化氣(NEB): 12.00 L／min( 氮?dú)?；氣簾氣( CUR)：14.00 L／min( 氮?dú)?；噴霧電壓( IS)：3000 V；去溶劑氣流：8.00 L／min( 氮?dú)?；碰撞氣( CAD): 6.00mL／min( 氮?dú)?；駐留時間: 80 ms。其他參數(shù)見表１：</p><p>　　表1 質(zhì)譜檢測部

35、分參數(shù)</p><p>　　Table 1 Partial parameters of mass detection</p><p><b>　　實(shí)驗(yàn)步驟</b></p><p><b>　　取樣</b></p><p>　　將樣品解凍，分別稱取均質(zhì)試樣各5 g(精確到0.01 g), 另取蝦仁稱6

36、個樣，分別置于50mL聚丙烯離心管中，分別加入沙星標(biāo)準(zhǔn)（100ng/ml），100ul,200ul,500ul,1000ul,0ul（空白）,100ul（加標(biāo)），標(biāo)上標(biāo)記。</p><p><b>　　提取</b></p><p>　　各加15ml沙星提取液，用IKA分散機(jī)均質(zhì)，先后順序?yàn)?ul（空白）、試樣、100ul（加標(biāo)）、100ul、200ul、500ul、1

37、000ul，在冷凍離心機(jī)上離心（9000r/m）10min，取上清液用漏斗過濾至錐形瓶，重復(fù)上述提取步驟1次，合并上清液，標(biāo)上對應(yīng)標(biāo)記。</p><p><b>　　過柱純化</b></p><p>　　先用水洗一次，裝上HLB小柱后先用甲醇洗5ml，再用水洗5ml，上樣后先用水洗5ml，再用5%甲醇洗5ml。使用隔膜真空泵抽氣，增大壓力45min后，用甲醇5ml洗脫

38、至5ml無蓋玻璃離心管。</p><p><b>　　氮吹</b></p><p>　　在40℃以下以微弱氮?dú)饬鞔抵两?，用沙星定容液定容?ml，于漩渦振蕩器上充分振蕩。</p><p><b>　　上樣</b></p><p>　　過0. 22μm 濾膜到進(jìn)樣瓶中, 供液相色譜-質(zhì)譜測定。<

39、;/p><p><b>　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析</b></p><p><b>　　數(shù)據(jù)分析</b></p><p><b>　　表2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)</b></p><p>　　Table 2 Experimental result data</p><p>

40、　　從結(jié)果可知，凍白蝦、海鮮配菜、貽貝肉的沙星含量均小于2，符合國家出口標(biāo)準(zhǔn)。 </p><p>　　表3 回收率試驗(yàn)結(jié)果</p><p>　　Table 2 Test results of recoveries</p><p><b>　　標(biāo)準(zhǔn)曲線</b></p>

41、<p>　　恩諾沙星360.2/342.2</p><p>　　恩諾沙星360.2/316.2</p><p>　　諾氟沙星320.3/276.3</p><p>　　諾氟沙星320.3/233.3</p><p>　　環(huán)丙沙星332.3/288.3</p><p>　　環(huán)丙沙星332.3/245.3<

42、/p><p>　　氧氟沙星362.3/261.3</p><p>　　氧氟沙星362.3/318.3</p><p>　　本文采用空白基質(zhì)添加標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法, 以降低不同基質(zhì)溶液對分析物離子化效率的影響, 真實(shí)反映樣品中4類沙星藥物的含量。配制質(zhì)量濃度為2.0～20.0 ug/kg 的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液, 以各組分峰面積（y）為縱坐標(biāo), 待測物的質(zhì)量濃度（x）為橫坐標(biāo)進(jìn)行

43、線性回歸, 由上圖結(jié)果表明, 4種沙星藥物線性關(guān)系良好, 相關(guān)系數(shù)（r）均大于0. 99。</p><p><b>　　回收率、精確度</b></p><p>　　在空白樣品中分別添加濃度為（100ng/ml）100ul,200ul,500ul,1000ul4個沙星混合標(biāo)準(zhǔn)液，按照實(shí)驗(yàn)操作，進(jìn)行回收率試驗(yàn)，每個添加水平重復(fù)6 次操作，測定精密度。在添加2.0～20.0

44、 ug/kg濃度范圍內(nèi)，加標(biāo)回收率在76.7～107.1％，多次測定的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在3.1～6.2％之間。見表3</p><p><b>　　實(shí)驗(yàn)討論與總結(jié)</b></p><p>　　液質(zhì)聯(lián)用法流動相的選擇</p><p>　　流動相中有機(jī)改性劑的含量也對沙星類藥物的分離有重要影響。在流動相中加入四丁基溴化氨，質(zhì)譜檢測中的離子抑制現(xiàn)象嚴(yán)重，所

45、有不能用四丁基溴化氨不能用, 我們可以選擇甲酸-甲醇-乙腈流動體系。在上述液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜條件下，出峰順序分別為諾氟沙星、氧氟沙星、環(huán)丙沙星和恩諾沙星。由于液相色譜柱不能將該四個組分完全分離，但因在質(zhì)譜中是用選擇離子對進(jìn)行定性和定量，待測的四種化合物具有不同的離子對，如表1。因此在液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測中仍能對該四種化合物進(jìn)行準(zhǔn)確的定性和定量。</p><p><b>　　提取劑的選擇</b>

46、</p><p>　　沙星類藥物為酸堿兩性物質(zhì), 提取方法主要有在堿性條件下提取、在中性條件下用有機(jī)溶液萃取及在酸性條件下提取。本次分別試驗(yàn)了乙腈，三氯甲烷，二氯甲烷，乙腈和三氯甲烷的混合液作為提取劑，提取蝦仁等水產(chǎn)樣品。因氧氟沙星，恩諾沙星，諾氟沙星，環(huán)丙沙星均為極性較強(qiáng)的化合物，所以選用乙腈作為提取劑回收效果最佳，而且容易濃縮, 提取回收率也可滿足要求。</p><p>　　提取酸度對

47、提取效率的影響</p><p>　　比較了用乙腈直接提取和在酸性條件下用乙腈提取樣品中的獸藥殘留，前者的提取效率約50%，而后者的提取效率大于70%。</p><p>　　濃縮方式對結(jié)果的影響</p><p>　　比較了在氮?dú)獗Ｗo(hù)下濃縮至近干和直接真空濃縮至近干兩種濃縮方式，前者的回收率大于70%，而后者的回收率小于50%。當(dāng)然兩種濃縮不能將提取液完全濃縮干，否則待

48、測物將損失很大。</p><p><b>　　樣品基質(zhì)效應(yīng)的消除</b></p><p>　　大氣壓噴霧電離離子源質(zhì)譜分析容易受樣品基質(zhì)的影響。從多試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn), 離子化受樣品基質(zhì)有非常強(qiáng)的抑制或促進(jìn)作用, 不同樣品基質(zhì)對各種喹諾酮類抗生素藥物離子化的抑制情況存在顯著的差異。為消除樣品基質(zhì)效應(yīng),選取一般不要求檢測沙星含量的空白樣品提取液作為標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋溶液, 可使標(biāo)準(zhǔn)

49、和樣品溶液具有同樣的離子化條件, 從而消除了樣品基質(zhì)效應(yīng)。但由于檢測出口類水產(chǎn)</p><p>　　品的大多數(shù)是蝦類，我們選取同是蝦類的單凍紅蝦仁作為空白樣品。</p><p><b>　　方法的專一性</b></p><p>　　本實(shí)驗(yàn)采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（MRM）模式，對每種分析物選擇一個母離子和由它產(chǎn)生的兩個子離子,獲得4個辨別點(diǎn)，并結(jié)合

50、子離子豐度的比定性, 滿足對藥物殘留確證實(shí)驗(yàn)定性的要求。再加之液相色譜分離, 將干擾降至最低, 保證了方法的專一性。采用本方法對蝦仁、海鮮配菜、貽貝等3種水產(chǎn)品的空白基體中4種喹諾酮類藥物進(jìn)行了檢測, 沒有出現(xiàn)干擾結(jié)果分析的情況。</p><p><b>　　應(yīng)用</b></p><p>　　該方法已應(yīng)用于水產(chǎn)品及其加工品中喹諾酮類藥物殘留的檢測。在對購自定海市場的2

51、0 份凍白蝦、20 份海鮮配菜及20 份貽貝樣品的檢測中, 有5 份凍白蝦和3份貽貝樣品中檢出喹諾酮類藥物殘留量, 多為恩諾沙星與環(huán)丙沙星。該方法靈敏度高，效果好。特別用于出口類水產(chǎn)品的檢驗(yàn)。</p><p>　　沙星類藥物存在問題及建議</p><p>　　雖然國家管理部門對水產(chǎn)品中恩諾沙星和環(huán)丙沙星的非法濫用進(jìn)行了嚴(yán)格的控制, 但在現(xiàn)有的監(jiān)管體系下, 恩諾沙星濫用現(xiàn)象仍然很嚴(yán)重。分析其

52、原因有以下幾個方面: ( 1) 法律法規(guī)不完善導(dǎo)致執(zhí)法力度不夠, 一些相關(guān)的制度還沒有建立或者還不完善; ( 2)養(yǎng)殖者對恩諾沙星過量使用的危害認(rèn)識不夠, 對恩諾沙星極其代謝物環(huán)丙沙星的危害評估尚不全面; ( 3)藥物源頭控制力度不夠; ( 4)監(jiān)管不到位, 一些小型養(yǎng)殖場不易管理。由于恩諾沙星在水產(chǎn)動物體內(nèi)有較長的半衰期, 且其代謝產(chǎn)物環(huán)丙沙星對人體危害較大, 因此必須注意, 對于供食用的水產(chǎn)品, 用藥后一般需20 d以上的停藥期。目

53、前國際趨勢為使用于人體之抑菌劑應(yīng)避免使用于畜禽動物及水產(chǎn)飼養(yǎng)上, 以免因用藥殘留而衍生細(xì)菌產(chǎn)生抗藥性的問題。因此, 恩諾沙星被列為禁用漁藥只是時間問題。</p><p>　　千萬不要刪除行尾的分節(jié)符，此行不會被打印?！敖Y(jié)論”以前的所有正文內(nèi)容都要編寫在此行之前。</p><p><b>　　小結(jié)</b></p><p>　　本方法采用XTerr

54、a MS C18 液相色譜柱，用酸性乙腈溶液提取,高效液相色譜分離、串聯(lián)質(zhì)譜檢測, 成功建立了動物組織樣品中4種喹諾酮類藥物殘留的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。方法簡便、快速、準(zhǔn)確, 方法的測定低限為10ug/kg, 達(dá)到目前國際上檢測喹諾酮類藥物殘留的先進(jìn)水平, 可用于雞肉和魚蝦肉等動物組織樣品中4種喹諾酮類藥物殘留的確證檢測。本液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測氟喹諾酮類殘留方法的建立，在我們實(shí)際檢測過程中，有多個經(jīng)液相色譜/ 熒光檢測方法判

55、為陽性的樣品但經(jīng)液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測卻為陰性。雖然熒光檢測器具有較高的選擇性，但仍有假陽性的可能性存在，而液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法確保了檢測結(jié)果的可靠性。方法簡單易操作, 精密度較好, 回收率較高, 干擾小, 可以在日常檢測工作中推廣應(yīng)用。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)</b></p><p>　　[1]默濤等編著,農(nóng)藥殘留量分析方法,上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,1

56、995</p><p>　　[2]林　峰, 林海丹, 吳映璇, 等. LC - MS - MS測定烤鰻中4種氟喹諾酮藥物殘留量[ J ]. 分析測試學(xué)報(bào), 2004, 23(5) : 43 - 47.</p><p>　　[3]李建武, 余瑞元, 袁明秀, 等. 生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)原理和方法[M ]. 北京: 北京大學(xué)出版社, 2004: 53 - 56.</p><p>

57、;　　[4]劉開永, 汪開毓. 恩諾沙星在水產(chǎn)中的應(yīng)用與研究[ J] . 中國獸藥雜志, 2004, 38( 10) : 32-34.</p><p>　　[5]日本對鰻魚中恩諾沙星殘留檢測方法。</p><p>　　[6]徐維海, 林黎明, 朱校斌, 等. 恩諾沙星及其代謝產(chǎn)物在吉富 羅非魚、中國對蝦體內(nèi)的殘留規(guī)律研究[ J] . 水產(chǎn)科學(xué), 2004,</p><p

58、>　　23( 7 ) : 5-8.</p><p>　　[7]《獸藥殘留分析》[M].李俊鎖、邱月明、王超。上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2002。</p><p>　　[8]福建省地方標(biāo)準(zhǔn)?！饿狑~中恩諾沙星、環(huán)丙沙星、諾氟沙星、氧氟沙星殘留檢測方法 高效液相色譜- 熒光檢測法》，DB35/T585-2004。</p><p>　　[9]《喹諾酮類藥物殘留色譜檢測

59、研究概述》[J].余以剛，劉繼平等.中國衛(wèi)生檢驗(yàn)，2003，13（4）：409~411. </p><p>　　[10]《高效液相色譜法同時測定鰻魚及其制品中八種磺胺類藥物》[J].林海丹，謝守新等.食品科學(xué)，2005，26（1）：176~179. </p><p>　　[11]　Zhong Feng（仲鋒） 中國獸藥雜志(Journal of Chinese　Veterinaria) 1

60、999，33（4）：5～8</p><p>　　[12]馬彬, 孫玉明, 陳笑艷等. 質(zhì)譜學(xué)報(bào), 2006,27( 3) : 163</p><p>　　[13]宋衛(wèi)國, 趙志輝. 農(nóng)產(chǎn)品安全風(fēng)險(xiǎn)評估方法及應(yīng)用探討[ J].中國農(nóng)學(xué)通報(bào), 2008, 24( 2 ) : 101-105.</p><p>　　[14]Marilyn J . Schneider , D

61、an J . Donoghue. J . Chromatogr. A ,2002 ,(780) :83～92.</p><p>　　[15]Géry van Vyncht , Amaya Jànosi , Guy Bordin , Brigitte Tous2saint , GuyMaghuin - Rogister , Edwin De Pauw , &Adela Rosa Rodr