利用海洋發(fā)光細(xì)菌進(jìn)行水產(chǎn)品中氯霉素殘留檢測(cè)的方法研究.pdf

1、針對(duì)目前水產(chǎn)品中氯霉素檢測(cè)限量極低以及發(fā)光細(xì)菌對(duì)環(huán)境污染高度敏感的特點(diǎn)，本文以建立快速、敏感、低成本的氯霉素檢測(cè)方法為最終目標(biāo)，以篩選具有發(fā)光性能穩(wěn)定、發(fā)光強(qiáng)度高、易于培養(yǎng)、并對(duì)氯霉素高度敏感的海洋發(fā)光細(xì)菌為出發(fā)點(diǎn)，研究了發(fā)光細(xì)菌的生長(zhǎng)發(fā)光性能，建立了利用發(fā)光細(xì)菌進(jìn)行水產(chǎn)品中氯霉素痕量檢測(cè)的方法，并對(duì)氯霉素作用發(fā)光細(xì)菌機(jī)制做了初步的研究。 第一：從青島近海分離的多株發(fā)光細(xì)菌中篩選出-株對(duì)氯霉素敏感的鰒發(fā)光桿菌Phototbac

2、terium leiognathi YL。該菌株發(fā)光穩(wěn)定，持續(xù)發(fā)光時(shí)間較長(zhǎng)，易于培養(yǎng)。該菌株在26℃液體培養(yǎng)48h，發(fā)光強(qiáng)度保持在3.0×105以上18h左右。對(duì)其進(jìn)行發(fā)光條件的優(yōu)化，最適發(fā)光的培養(yǎng)條件為：溫度25-30℃，搖瓶轉(zhuǎn)速為150r/m，初始pH為7.5，最適NaC1濃度為3-5％；最適甘油濃度為0.4％。對(duì)P.leiognathi YL的趨化性質(zhì)進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)該菌株對(duì)氯霉素高度敏感，適合作為檢測(cè)氯霉素的工具菌株。

3、第二：構(gòu)建鰒發(fā)光桿菌P.leiognathi YL檢測(cè)水產(chǎn)品中氯霉素殘留的方法體系：接種單菌落快速培養(yǎng)，制備出適宜檢測(cè)的菌懸液，在細(xì)菌培養(yǎng)液中添加不同濃度的氯霉素溶液，研究氯霉素濃度與細(xì)菌發(fā)光強(qiáng)度抑制率之間的關(guān)系。通過控制菌體起始發(fā)光強(qiáng)度，菌液與氯霉素作用時(shí)間，菌液與氯霉素體積比等建立發(fā)光細(xì)菌檢測(cè)水產(chǎn)品中氯霉素體系。結(jié)果表明，菌體的起始發(fā)光強(qiáng)度控制在3.0×105；菌液與氯霉素的最佳作用時(shí)間為30min，菌液與氯霉素的最佳體積配比為1:

4、1，氯霉素濃度與細(xì)菌發(fā)光強(qiáng)度抑制率呈良好的線性關(guān)系。該方法的線性范圍為0.1 ng/mL-1.0 ng/L，相關(guān)系數(shù)R2為0.989，該體系對(duì)氯霉素的檢測(cè)靈敏度可以達(dá)到0.1 ng/mL，可以作為水產(chǎn)品中痕量氯霉素殘留的一種快速、靈敏的檢測(cè)方法。用于水產(chǎn)品的氯霉素加標(biāo)回收試驗(yàn)，魚肉中添加濃度為0.1 ng/g－1.0ng/g時(shí)，回收率在40.34％-114.26％之間。 第三：為了更深入研究發(fā)光細(xì)菌檢測(cè)法，本文對(duì)氯霉素作用發(fā)光