建立免疫PCR方法檢測牛奶中氯霉素的殘留.pdf

1、氯霉素(chloramphenicol，CAP)是一種廣譜抗生素，于1949年引入臨床實踐，由于其價廉易得，治療效果好，廣泛應(yīng)用于動物各種傳染病的治療。隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)CAP具有抑制血細胞形成、導(dǎo)致再生性障礙貧血等毒性，它在食用性動物體內(nèi)的殘留對人類健康構(gòu)成了巨大的威脅。本研究在制備CAP全抗原的基礎(chǔ)上，研制抗CAP單克隆抗體;利用抗CAP單克隆抗體建立IPCR分析法，檢測牛奶中CAP的殘留。主要研究內(nèi)容如下:
　　 1、C

2、AP全抗原的合成及多克隆抗體的制備
　　 以BSA、OVA為載體蛋白，分別采用EDC法和重氮化法制備CAP全抗原，結(jié)果以EDC法成功科備CAP全抗原。其免疫的3號小鼠血清效價大于1∶64000，對CAP的抑制效果最好，表明成功制備抗CAP多克隆抗體。
　　 2、抗CAP單克隆抗體的制備及ELISA檢測方法的初步建立
　　 采用細胞融合和雜交瘤分選技術(shù)，經(jīng)過篩選和亞克隆，成功獲得一株能穩(wěn)定分泌抗CAP單克隆抗體的細

3、胞株，命名為1B7，抗體亞型為IgG1，κ。將187接種于Balb/c小鼠腹腔，得到的小鼠腹水經(jīng)純化后效價為1∶512000。以該抗體建立ELISA競爭抑制標準曲線，其線性回歸方程為y=-10.12ln(x)+70.458(R2=0.9882)，IC50和LOD分別為7.39、0.24 ng/mL，檢測范圍(IC20-IC80)為0.39～145.47 ng/mL，與TC、NFX、KAN、AMP、SD未見明顯交叉，與CAPs的交叉率高達

4、2052.8％。
　　 3、基于抗CAP單克隆抗體的免疫PCR檢測方法的初步建立
　　 初步建立IPCR方法檢測CAP，得到的最佳實驗條件如下:抗原包被濃度為10μg/mL，生物素?；贵w的工作濃度為1∶64000，親和素工作濃度為10μg/mL，生物素標記的DNA投入量為10pg。在最佳條件下建立IPCR標準曲線，其線性回歸方程為y=0.1079ln(x)+13.19，R2為0.9877，最低檢測限為1.380pg/m