標(biāo)記免疫技術(shù)

1、標(biāo)記免疫技術(shù),醫(yī)學(xué)檢驗系臨床微生物學(xué)及免疫學(xué)教研室二OO四年三月,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,標(biāo)記免疫技術(shù)=,免疫技術(shù)+標(biāo)記技術(shù),來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,標(biāo)記免疫技術(shù),放射免疫技術(shù)熒光免疫技術(shù)酶免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光技術(shù)金免疫技術(shù) ???,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,第八章 放射免疫技術(shù) 類型：放射免疫分析（radioimmunoassay,RIA）免

2、疫放射分析（immunoradiometric assay,IRMA） 廣義放射免疫技術(shù)還包括放射受體分析（使用受體測量抗原）和放射配體結(jié)合分析（使用配體研究受體）。 特點:靈敏度高(10-9-10-15g/L)、特異性強(qiáng)、 重復(fù)性好等,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,標(biāo)記物:常用的核素有兩大類γ射線： 131I、125I、57Cr和60Coβ射線：14C

3、、3H和32P。使用最廣泛的是：125I ①性質(zhì)活潑、易制備標(biāo)記物 ②對被標(biāo)記物的免疫活性影響小 ③測量方法簡便、已推廣 ④半衰期較長、核素豐度高,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,標(biāo)記方法125I的標(biāo)記原理：取代分子中酪氨酸或酪胺殘基及組胺殘基上的氫原子

4、方法：直接標(biāo)記法 氯胺T法和乳過氧化物酶法間接標(biāo)記法 聯(lián)接標(biāo)記法,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,標(biāo)記物純化 對游離的125I等試劑與標(biāo)記物進(jìn)行分離 方法：分子篩凝膠過濾；離子交換層析；聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）；高效液相色譜（HPLC）,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,標(biāo)記物鑒定放射化學(xué)純度

5、 單位標(biāo)記物中結(jié)合在被標(biāo)記物上的放射性占總放射性的百分率。一般要求大于95％。免疫活性 標(biāo)記過程中，被標(biāo)記物活性損傷程度。B/T％>80％， B/T％ ↑ 抗原損傷↓。比放射性 單位化學(xué)量標(biāo)記物中所含的放射性強(qiáng)度. 常用Ci/g、mCi/mg、Ci/mmol等單位表示。 比放射性↑ 方法更靈敏；過高 輻射自損傷大，對標(biāo)記物免疫活性影響大

6、，儲存穩(wěn)定性差 。,,,,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,抗血清鑒定 多克隆抗體的抗血清是放射免疫分析的主要試劑之一，其質(zhì)量直接影響方法的特異性和靈敏度。親合力 選用親和常數(shù)K值大(109~1012 L//mol)抗血清特異性 其程度可直接影響結(jié)果的準(zhǔn)確性 滴度 最大稀釋度。在本技術(shù)方法中是指結(jié)合50％標(biāo)記抗原時的抗血清的稀釋度。,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載

7、,放射免疫分析（ RIA ）基本原理 采用定量的標(biāo)記抗原（Ag＋）和非標(biāo)記抗原（Ag）競爭性結(jié)合有限量特異性抗體（Ab）的反應(yīng)。,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,以未結(jié)合的Ag*為F，Ag*Ab復(fù)合物為B，則B/F與Ag的量變存在著函數(shù)關(guān)系。,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,測定方法與步驟1

8、.抗原抗體反應(yīng)：平衡法或非平衡法2.分離結(jié)合與游離標(biāo)記物 沉淀劑沉淀復(fù)合物，離心分離。如第二抗體沉淀法、聚乙二醇沉淀法或活性炭吸附法等。要求：分離徹底，迅速；分離試劑和過程不影響反應(yīng)平衡；操作簡便，重復(fù)性好且經(jīng)濟(jì)。 3.放射性測定及數(shù)據(jù)處理 晶體閃爍計數(shù)儀(γ射線)或液體閃爍計數(shù)儀( β射線) 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算待檢抗原濃度。,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,免疫放射分析（IRMA）基本

9、原理 單位點IRMA： 利用過量標(biāo)記抗體與待測抗原進(jìn)行反應(yīng)，形成抗原抗體復(fù)合物，反應(yīng)平衡后，用固相抗原結(jié)合反應(yīng)液中剩余的未結(jié)合標(biāo)記抗體并將其分離，測定上清液的放射量。,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,雙位點IRMA 先用固相抗體與抗原反應(yīng)結(jié)合,然后再用過量的標(biāo)記抗體與已結(jié)合于固相抗原的另一抗原決定簇結(jié)合,形成固相抗體-抗原-標(biāo)記抗體復(fù)合物,洗棄反應(yīng)液中剩余的標(biāo)記抗體

10、,測定固相上的放射性。,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,IRMA與RIA的異同點 標(biāo)記物 在RIA中 核素標(biāo)記抗原，抗原有不同種類，根據(jù)其化學(xué)結(jié)構(gòu)，標(biāo)記時需用不同的核素和不同的方法。在IRMA中 核素標(biāo)記抗體。抗體為蛋白質(zhì)，有利于碘化標(biāo)記，不同抗體標(biāo)記方法基本相同。標(biāo)記抗體的比活度高，提高了分析的靈敏度。反應(yīng)速率 反應(yīng)速度與反應(yīng)物的濃度呈正比，在IRMA中標(biāo)記抗體是

11、過量的，而且不存在競爭性結(jié)合復(fù)雜的反應(yīng)，所以反應(yīng)速度較RIA快。在RIA中抗體量是微量的，所以一定要用高親和力的多克隆抗體，而在IRMA中應(yīng)用親和力較低的單克隆體也能得到滿意的結(jié)果。,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,反應(yīng)原理 RIA為競爭抑制，測得放射性的量與受檢抗原呈反比。IRMA為非競爭結(jié)合，劑量反應(yīng)曲線為正相關(guān)的直線關(guān)系。特異性 在雙位點IRMA中，一般均應(yīng)用針對不同位點的單克隆抗體，其交叉反應(yīng)率低于應(yīng)

12、用多克隆抗體的RIA。 檢測范圍 通常RIA的工作范圍為2-3個數(shù)量級，而RIMA可達(dá)3個數(shù)量級以上。,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,分析誤差 RIA中加入的抗體和標(biāo)記抗原都是定量的，加樣誤差可嚴(yán)重影響測定結(jié)果。IRMA中標(biāo)記和固相抗體在反應(yīng)中都是過量的，只有受檢標(biāo)本的加樣誤差才會影響分析結(jié)果。因此，IRMA的批內(nèi)和批間變異均比較小。其他 RIA可以測定大分子量與小分子量的物質(zhì)，雙位點IRM

13、A只能測定在分子上具有2個以上抗原表位的物質(zhì)。在RIA中應(yīng)用的為多克隆抗體，親和力和特異性要求較高，但用量很少。IRMA中標(biāo)記抗體和固相抗體用量較多，一般均用來源豐富、特異性較高的單克隆抗體。,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,放射免疫技術(shù)的應(yīng)用 常用于各種激素、微量蛋白、腫瘤標(biāo)志物和藥物等微量物質(zhì)的測定。 問題：放射性污染、常用核素半衰期短、試劑盒穩(wěn)定期不長不易自動化儀器分析等。,來自www.372

14、2.cn中國最大的資料庫下載,第九章 免疫熒光技術(shù)免疫熒光技術(shù)(immunofluorescence technique)是標(biāo)記免疫技術(shù)中發(fā)展最早的一種。 是將抗原抗體反應(yīng)的特異性與熒光物質(zhì)檢測的敏感性和直觀性結(jié)合起來的一種方法。,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,基本原理 利用熒光素標(biāo)記抗體，使之在涂片上或組織切片上與標(biāo)本中的待檢抗原特異結(jié)合，采用高發(fā)光效率的點光源，透過濾色板發(fā)出一定波長的光，使

15、結(jié)合在標(biāo)本上的熒光素被激發(fā)而產(chǎn)生熒光，借助熒光顯微鏡觀察底物片上熒光染色形態(tài)，來判斷有無待檢抗原或抗體。,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,第一節(jié) 熒光的基本知識,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,異硫氰酸熒光素（FITC） 為黃色或橙黃色結(jié)晶粉末，分子量為389.4，最大吸收光波長為490-495nm，最大發(fā)射光波長520-530nm，呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光，是應(yīng)用最廣泛的熒光素。主要優(yōu)點：①人眼對

16、黃綠色較為敏感；②通常切片標(biāo)本中的綠色熒光少于紅色，降低背景干擾 。,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,四乙基羅丹明（RB200） 為橘紅色粉末，不溶于水，易溶于酒精和丙酮。性質(zhì)穩(wěn)定，可長期保存。最大吸收光波長為570nm，最大發(fā)射光波長為595－600nm，呈橘紅色熒光。常用于雙重標(biāo)記或?qū)Ρ热旧?來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,四甲基異硫氰酸羅丹明

17、（TRITC） 最大吸引光波長為550nm，最大發(fā)射光波長為620nm，呈橙紅色熒光。其異硫氰基可與蛋白質(zhì)結(jié)合，但熒光效率較低。,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,熒光分子的輻射能力在受到激發(fā)光較長時間的照射后會減弱甚至猝滅，一些化合物對熒光有猝滅作用，因此熒光物質(zhì)的保存應(yīng)注意避免光（特別是紫外光）的直接照射和與其他化合物的接觸。,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,熒光抗體的制備 作為標(biāo)記的熒光素應(yīng)

18、符合以下要求： ①應(yīng)具有能與蛋白質(zhì)分子形成共價健的化學(xué)基團(tuán)，與蛋白質(zhì)結(jié)合后不易解離，而未結(jié)合的色素及其降解產(chǎn)物易于清除。 ②熒光效率高,與蛋白質(zhì)結(jié)合后，仍能保持較高的熒光效率。 ③熒光色澤與背景組織的色澤對比鮮明。 ④與蛋白質(zhì)結(jié)合后不影響蛋白質(zhì)原有的生化與免疫性質(zhì)，與蛋白質(zhì)的結(jié)合物穩(wěn)定，易于保存。 ⑤標(biāo)記方法簡單、安全無毒。,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,熒光抗體是將熒光素（如FITC）與特異性抗

19、體以化學(xué)方式共價結(jié)合而成。 標(biāo)記方法：攪拌法(適合大樣品) 透析法(適合小樣品)標(biāo)記抗體的純化：透析法 層析分離法,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,熒光抗體的鑒定,F/P比率： 將制備的熒光抗體稀釋至A280≈1.0，分別測讀A280（蛋白質(zhì)特異吸收峰）和標(biāo)記熒光素的特異吸收峰,,來自www.3722.cn中

20、國最大的資料庫下載,F/P值越高，說明抗體分子上結(jié)合的熒光素越多，反之則越少。一般用于固定標(biāo)本的熒光抗體以F/P＝1.5為宜，用于活細(xì)胞染色的以F/P＝2.4為宜。,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,抗體效價：效價越大標(biāo)記抗體的特異性越高非特異熒光越少。效價在1:16-1:32者較為理想 抗體特異性 ：免疫電泳和交叉免疫電泳觀察特異性沉淀線或沉淀峰，在紫外線照射下發(fā)出強(qiáng)烈熒光,來自www.3722.cn中國最大的資料庫

21、下載,第二節(jié) 免疫熒光顯微技術(shù)基本原理：使熒光抗體與標(biāo)本切片中組織或細(xì)胞表面的抗原進(jìn)行反應(yīng)，洗滌除去游離的熒光抗體后，于熒光顯微鏡下觀察，在黑暗背景上可見明亮的特異熒光。,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,,直接法,熒光抗體染色,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,直接法優(yōu)點：操作簡便、特異性高、非特異 熒光染色因素少，缺點：靈敏度偏低，每檢查一種抗原需制備相應(yīng)的特異熒光抗體,來自www.3722.c

22、n中國最大的資料庫下載,,,間接法,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,間接法優(yōu)點：靈敏度高，在不同抗原的檢測中只需應(yīng)用一種熒光抗體。既可檢測抗原，也可檢測抗體。,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,免疫熒光技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗中的應(yīng)用在細(xì)菌學(xué)檢驗中主要用于菌種的鑒定。免疫熒光用于梅毒螺旋體抗體的檢測是梅毒特異性診斷常用方法之一。用熒光抗體染色法可檢出病毒及其繁殖情況。在寄生蟲感染診斷中，間接免疫熒光試驗（I

23、FAT）是當(dāng)前公認(rèn)的最有效的檢測瘧疾抗體的方法。,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,免疫熒光法還是檢測自身抗體的好工具，在自身免疫病的實驗診斷中應(yīng)用廣泛。其突出優(yōu)點是能以簡單方法同時檢測抗體和與抗體起特異反應(yīng)的組織成分，并能在同一組織中同時檢查抗不同組織成分的抗體。熒光抗體技術(shù)的一種特殊應(yīng)用是流式細(xì)胞分析（flowcytometry）?？捎糜跈z測細(xì)胞大小、折散率、粘滯度等，更常用于T細(xì)胞亞群等的檢測。,來自www.372

24、2.cn中國最大的資料庫下載,第十章 酶免疫技術(shù),來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,第一節(jié) 酶免疫技術(shù)概述基本原理 利用酶催化底物反應(yīng)的生物放大作用,提高特異性抗原-抗體免疫學(xué)反應(yīng)的檢測敏感性的一種標(biāo)記免疫技術(shù)。,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,基本特點： ①標(biāo)記后保留酶和抗原(抗體)的活性 ②酶促反應(yīng)專一性，保證特異性 ③底物反應(yīng)放大作用，提高敏感性

25、 ④酶標(biāo)試劑保存穩(wěn)定 ⑤操作簡便，安全易行,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,主要試劑的制備與要求,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,一、酶與酶作用底物（一）用于標(biāo)記酶的要求：酶活性高標(biāo)記后酶活性穩(wěn)定，且不影響標(biāo)記抗原與抗體的免疫反應(yīng)性酶催化底物后信號易判定或測定酶活性不受樣品中其他成分的影響酶、輔助因子及底物理化性質(zhì)穩(wěn)定，安全無害，價廉,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,

26、（二）常用酶及其底物1.辣根過氧化物酶（HRP） 常用底物：鄰苯二胺（OPD）：反應(yīng)顯橙黃色，應(yīng)避光，致癌性四甲基聯(lián)苯胺（TMB）：反應(yīng)后呈藍(lán)色，無需避光，無致癌性，但水溶性差。,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,2. 堿性磷酸酶（AP） 常用底物為對硝基苯磷酸酯（p-NPP），產(chǎn)物為黃色。 * AP靈敏性高與HRP，但不易獲得純品，穩(wěn)定性及酶標(biāo)記物

27、收率 低于HRP，且價高，故應(yīng)用不如HRP普及。,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,二、酶標(biāo)記抗體或抗原基本要求： 酶標(biāo)記抗原純度要高，抗原性完整；抗體的特異性好，效價高，親和力強(qiáng)，比活性高以及易于批量生產(chǎn)和分離純化,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,酶標(biāo)記方法 1.交聯(lián)法 以雙功能交聯(lián)劑為“橋”，分別與酶和抗體（抗原）連接形成結(jié)合物。如戊二醛交聯(lián)法。2.直

28、接法 用過碘酸鈉活化酶蛋白分子后，再與抗體（抗原）結(jié)合。僅適用于含糖蛋白分子的酶（如HRP）標(biāo)記物制備。,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,三、固相載體基本要求 結(jié)合容量高，結(jié)合穩(wěn)定；可與抗原抗體復(fù)合物等大分子蛋白結(jié)合；生物大分子固化后仍保持活性；固化方法簡便易行、快捷經(jīng)濟(jì)。,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,固相載體的種類與選擇1.塑料制品 材料經(jīng)濟(jì)，操作簡便，易于自動化，

29、最常用。2.微顆粒 結(jié)合容量大，反應(yīng)迅速，逐漸普遍用于自動化分析。3.膜載體 硝酸纖維素膜（NC）、尼龍膜等微孔濾膜，廣泛應(yīng)用于定性或半定量的斑點ELISA。,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,四、免疫吸附劑原理：非共價鍵吸附或共價鍵化學(xué)偶聯(lián)（包被）。一般采用偏堿性（pH9.6）的碳酸鹽溶液（ELISA板）。封閉：1％－5％牛血清白蛋白或5％－20％小牛血清。,來自www.3722.cn中國最大的資

30、料庫下載,酶免疫技術(shù)的分類 酶免疫組化 用于檢測組織切片或細(xì)胞涂片中的抗原和抗體 酶免疫技術(shù) 均相酶免疫測定 酶免疫測定 固相酶免疫測定 異相酶免疫測定 （ELISA）

31、 液相酶免疫測定,,,,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,均相酶免疫測定Ag+Ab-E Ag Ab-E + Ab-E 基本原理：利用酶標(biāo)抗體結(jié)合抗原形成復(fù)合物后，標(biāo)記酶的活性發(fā)生改變的原理，在不將復(fù)合物與游離酶標(biāo)抗體分離的情況下，直接測定系統(tǒng)中總的標(biāo)記酶活性的改變，進(jìn)而推算出待檢樣品中的抗原量。,,,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,異相酶免疫測定（enzymeimmunoassay,

32、EIA） 基本原理：在抗原抗體反應(yīng)后，先將抗原抗體復(fù)合物與游離的酶標(biāo)抗體分離，再測定酶標(biāo)記的復(fù)合物催化底物顯色的活性，最后推算出樣品中抗原的含量。液相EIA：分離劑分離游離的和結(jié)合的標(biāo)記物。固相EIA：固相載體結(jié)合酶標(biāo)復(fù)合物，經(jīng)洗滌去除游離的酶標(biāo)抗體。如ELISA。,Ag+Ab-E Ag Ab-E + Ab-E,,,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,,第二節(jié) 酶聯(lián)免疫吸附試驗enzyme linke

33、d immunosorbent assay(ELISA),來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,基本原理：,使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性 在測定時，把受檢標(biāo)本（測定其中的抗體或抗原）和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng),來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開，最后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一

34、定的比例。 加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺進(jìn)行定性或定量分析,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,ELISA技術(shù)類型：,ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體，在這種測定方法中有3種必要的試劑：固相的抗原或抗體，酶標(biāo)記的抗原或抗體，酶作用的底物。,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,,來自www.3722.cn中國最大的資料庫

35、下載,,,,1．雙抗體夾心法,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,特點：非競爭結(jié)合反應(yīng)常用于抗原的檢測適用于分子中具有至少兩個抗原決定簇的多價抗原，而不能用于小分子半抗原的檢測所用兩種抗體分別針對同一個抗原分子的不同抗原決定簇,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,2．間接法,,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,來自www.3722.cn中國最大

36、的資料庫下載,3.競爭法,,,,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,特點：用于抗原和半抗原的定量測定，也可對抗體進(jìn)行測定。酶標(biāo)Ag（Ab）與樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的非標(biāo)記Ag（Ab）具有相同的與固相Ab(Ag)結(jié)合的能力。反應(yīng)體系中，固相Ab（Ag）和酶標(biāo)Ag（Ab）是固定限量的，且前者的結(jié)合位點少于酶標(biāo)記與非標(biāo)記Ag（Ab）的分子數(shù)量和。反應(yīng)后，結(jié)合與固相載體上復(fù)合物中被測定的酶標(biāo)Ag（Ab）的量（酶活性）與樣品中非標(biāo)記A

37、g（Ab）的濃度成反比。,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,4.捕獲法（反向間接法） 主要用于 血清中某種抗體亞型成分（如IgM）的測定。 基本原理：,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,,第三節(jié) 膜載體的酶免疫測定 固相膜免疫測定與ELISA相類似,其特點是以微孔膜作為固相.標(biāo)記物可用酶和各種有色微粒子,如彩色乳膠、膠體金等。常用固相膜為硝酸纖維素膜。類型：免疫滲濾試驗：穿流形式

38、 免疫層析試驗：橫流形式 斑點酶免疫吸附試驗（dot-ELISA） 免疫印跡法 (Western blot),來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,免疫印跡法（immunoblottingtest，IBT） 亦被稱為Western blot分三個階段進(jìn)行 :SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）電轉(zhuǎn)移 酶免疫定位,來自www.3722.cn中國最大

39、的資料庫下載,SDS-PAGE 抗原等蛋白樣品經(jīng)SDS處理后帶陰電荷，在聚丙烯胺凝膠中從陰極向陽泳動，分子量越小，泳動速度就越快。此階段分離效果肉眼不可見（只有在染色后才顯出電泳區(qū)帶）,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,電轉(zhuǎn)移 將在凝膠中已經(jīng)分離的條帶轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上，選用低電壓（100V）和大電流（1-2A），通電45min轉(zhuǎn)移即可完成。此分階段分離的蛋白質(zhì)

40、條帶肉眼仍不可見。,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,酶免疫定位 將印有蛋白質(zhì)條帶的硝酸纖維素膜（相當(dāng)于包被了抗原的固相載體）依次與特異性抗體和酶標(biāo)第二抗體作用后，加入能形成不溶性顯色物的酶反應(yīng)底物，使區(qū)帶染色。陽性反應(yīng)的條帶清晰可辨，并可根據(jù)SDA-PAGE加入的分子量標(biāo)準(zhǔn)，確定各組分的分子量。,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,來自www.3722.c

41、n中國最大的資料庫下載,第四節(jié) 酶免疫測定的應(yīng)用,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,病原體及其抗體廣泛應(yīng)用于傳染病的診斷。病毒如肝炎病毒、風(fēng)疹病毒、皰疹病毒、輪狀病毒等；細(xì)菌如鏈球菌、結(jié)核分枝桿菌、幽門螺桿菌和布氏桿菌等；寄生蟲如弓形體、阿米巴、瘧原蟲等。蛋白質(zhì)如各種免疫球蛋白、補(bǔ)體組分、腫瘤標(biāo)志物（例如AFP、CEA、PSA）、多種血漿蛋白質(zhì)、同工酶、激素（如HCG、TSH）。非肽類激素如T3、T4、雌激素、皮質(zhì)醇

42、等。藥物和毒品如地高辛、苯巴比妥、慶大霉素、嗎啡等。,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,ABC-ELISA (應(yīng)用親和素和生物素的ELISA),來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,生物素-親合素系統(tǒng) (biotin-avidin system，BAS)，是70年代后期應(yīng)用于免疫學(xué)，并得到迅速發(fā)展的一種新型生物反應(yīng)放大系統(tǒng)。由于它具有生物素與親合素之間高度親和力及多級放大效應(yīng)，并與熒光素、酶、同位素等免疫標(biāo)記

43、技術(shù)有機(jī)地結(jié)合，使各種示蹤免疫分析的特異性和靈敏度進(jìn)一步提高。,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,親和素是一種糖蛋白，可以和4個生物素分子親密結(jié)合?，F(xiàn)在使用更多的是從鏈霉菌中提取的鏈霉和素（strepavidin）。 生物素（biotin）。卵黃、肝組織提取用化學(xué)方法制成的衍生物，生物素－羥基琥珀亞胺酯（biotin-hydroxysuccinimide，BNHS）。末端羧基可與蛋白質(zhì)、糖類和酶等多種類型的大小分子形成生

44、物素化的產(chǎn)物。,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,親和素與生物素的結(jié)合，雖不屬免疫反應(yīng)，但特異性強(qiáng)，親和力大，兩者一經(jīng)結(jié)合就極為穩(wěn)定。由于1個親和素分子有4個生物素分子的結(jié)合位置，可以連接更多的生物素化的分子，形成一種類似晶格的復(fù)合體。因此把親和素和生物素與ELIS偶聯(lián)起來，就可大提高ELISA的敏感度。,來自www.3722.cn中國最大的資料庫下載,橋聯(lián)法ABC-ELISA（avidinbiotincomplex-EL