應(yīng)用組織芯片技術(shù)和免疫組化方法篩選鼻咽癌預(yù)后相關(guān)分子標(biāo)記物.pdf

1、背景與目的：鼻咽癌是我國華南地區(qū)最常見的惡性腫瘤之一，流行病學(xué)調(diào)查和病因?qū)W研究顯示，其發(fā)病與環(huán)境、遺傳、EB病毒感染等因素的作用密切相關(guān)。腫瘤局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致治療失敗的首要原因。目前臨床使用的傳統(tǒng)臨床分期用于判定鼻咽癌患者預(yù)后存在一定不足，具有相同臨床分期的鼻咽癌患者，預(yù)后有明顯差異。因此，尋找有效的鼻咽癌分子標(biāo)記物來預(yù)測患者預(yù)后對鼻咽癌的治療意義重大。 材料與方法：選取中山大學(xué)腫瘤防治中心病理科1990-2002年期間

2、有相應(yīng)臨床隨訪資料的鼻咽癌組織標(biāo)本280例，構(gòu)建成4張鼻咽癌組織芯片，用免疫組織化學(xué)方法分別檢測p53、LMP-1、Survivin、VEGF、CD147、LYVE-1和CD31等分子標(biāo)記物在鼻咽癌組織中的表達，分析上述分子標(biāo)記物的表達與鼻咽癌臨床病理變化和患者預(yù)后的關(guān)系。 結(jié)果：1.鼻咽癌組織各分子標(biāo)記物表達與臨床病理變化及預(yù)后的關(guān)系(1)p53陽性表達率為94/247(38.06％)，鼻咽癌組織p53的表達與患者性別、年齡、

3、TNM分期、T分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無關(guān)(P＞0.05)；p53在鼻咽癌組織中表達陰性組和陽性組患者5年總生存率分別為56.20％及58.85％，生存率沒有顯著性差異(P=0.8071)。 (2)LMP-1陽性表達率為130/200(65％)，LMP-1在鼻咽癌組織中的表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移正相關(guān)(P＜0.05)；與患者性別、年齡、TNM分期、T分期、復(fù)發(fā)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無關(guān)(P＞0.05)；鼻咽癌組織LMP-1表達陰性組和陽性組

4、患者5年總生存率分別為56.62％和56.13％，無顯著性差異。 (3)Survivin陽性表達率為108/206(52.43％)，鼻咽癌組織Survivin的表達與原發(fā)灶的侵犯范圍、TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移正相關(guān)(P＜0.05)，與患者性別、年齡、局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無關(guān)(P＞0.05)；鼻咽癌組織Survivin表達陰性和陽性組患者5年總生存率分別為70.54％和42.32％，總生存率差異顯著(P=0.0006)；晚期患者鼻咽癌

5、組織Survivin表達陰性和陽性組5年總生存率分別為73.41％和36.51％，總生存率差異顯著(P=0.0002)。 (4)VEGF陽性表達率為86/188(45.74％)，鼻咽癌組織VEGF的表達與TNM分期、復(fù)發(fā)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移正相關(guān)(P＜0.05)，與患者的性別、年齡、T分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)(P＞0.05)；鼻咽癌組織VEGF表達陰性和陽性組患者5年總生存率分別為67.75％和40.11％，總生存率差異顯著(P=0.0028

6、)；晚期患者鼻咽癌組織中VEGF表達陰性和陽性組5年總生存率分別為65.22％和35.03％，總生存率差異顯著(P=0.0025)。 (5)鼻咽癌組織中存在Survivin與VEGF協(xié)同表達的104例標(biāo)本，兩者表達同為陽性患者5年生存率為18.22％，同為陰性患者5年生存率為73.54％，Survivin與VEGF表達同為陽性的鼻咽癌患者總生存顯著低于同為陰性患者(P=0.0003)。 (6)CD147陽性表達率為121

7、/204(59.31％)，CD147在鼻咽癌組織中的表達與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移正相關(guān)(P＜0.05)，與性別、年齡、TNM分期、腫瘤原發(fā)灶侵犯范圍、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及局部復(fù)發(fā)無關(guān)(P＞0.05)；鼻咽癌組織中CD147表達陰性組和陽性組患者5年總生存率分別為66.08％及45.20％，差異顯著(P=0.0009)。 (7)LYVE-1的高表達率為87/185(47.03％)，鼻咽癌組織中LYVE-1的表達與腫瘤局部復(fù)發(fā)正相關(guān)(P＜0.05)，

8、與性別、年齡、TNM分期、鼻咽癌原發(fā)灶的侵犯范圍、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無關(guān)(P＞0.05)；LYVE-1高表達組患者5年生存率為47.89％，低表達組5年生存率為65.17％，差異顯著(P=0.0231)。 (8)鼻咽癌組織微血管密度(MVD)(-χ)±s=31.38±14.51，腫瘤組織中MVD與腫瘤復(fù)發(fā)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移存在相關(guān)性(P＜0.05)，與患者性別、年齡、TNM分期、腫瘤原發(fā)灶侵犯范圍、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)(P＞0.05)。鼻

9、咽癌組織MVD＞32(均數(shù))組患者5年生存率為42.32％，MVD=32組5年生存率為61.03％，差異顯著(P=0.0022)。 2.各分子指標(biāo)在鼻咽癌中表達的相關(guān)性(1)Survivin與LMP-1在鼻咽癌組織中的表達正相關(guān)(r=0.256，P=0.004)；而p53和LMP-1，p53和Survivin的表達之間沒有相關(guān)性(P＞0.05)。 (2)Survivin與VEGF在鼻咽癌組織中的表達正相關(guān)(r=0.265

10、，P=0.002)；LYVE-1和VEGF表達正相關(guān)(r=0.45，P=0.001)。CD147與VEGF，CD147與MVD之間的表達都沒有相關(guān)性(P＞0.05)。 (3)Cox回歸模型分析結(jié)果提示TNM分期及蛋白VEGF、CD147、LYVE-1表達均是鼻咽癌獨立的預(yù)后因子，TNM分期晚及蛋白VEGF、CD147、LYVE-1高水平表達患者預(yù)后較差，P值分別為0.012、0.021、0.000和0.023。 結(jié)論：1

11、.組織芯片技術(shù)具有體積小、信息含量大等優(yōu)點，是病理學(xué)研究高效快速的工具。 2.p53在鼻咽癌組織的表達與性別、年齡、臨床分期、復(fù)發(fā)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及預(yù)后無關(guān)；LMP-1高表達者更易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；Survivin高表達與臨床分期、T分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移正相關(guān)，是鼻咽癌患者尤其是晚期患者預(yù)后不良指標(biāo)。 3.VEGF在鼻咽癌的高表達與TNM分期、復(fù)發(fā)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)；CD147高表達患者更易遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移；LYVE-1高表達患者更易復(fù)發(fā)；MV