用于溶藻弧菌快速檢測的免疫磁珠技術(shù)的研究.pdf

1、近年來，我國海水養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展迅速，特別是高密度養(yǎng)殖模式的推廣，造成養(yǎng)殖生物細(xì)菌性疾病發(fā)生的頻率和范圍逐漸擴(kuò)大。由于溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)是海洋優(yōu)勢弧菌之一，故由溶藻弧菌引起的養(yǎng)殖品種的病害也占有很高比例。由溶藻弧菌引起的魚、蝦、貝類等養(yǎng)殖品種致病，對我國養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)造成很大損失。目前我國對于養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)品種溶藻弧菌等的細(xì)菌性疾病的治療，主要依靠投放大量的抗生素，長此以往不僅使病原菌產(chǎn)生了耐藥性，而且由于藥物的殘留同時(shí)

2、也對人類的健康造成重大威脅。因此建立溶藻弧菌的快速、準(zhǔn)確、敏感檢測方法是十分重要的。即能夠在早期診斷出溶藻弧菌潛在的致病威脅，還可以在早期進(jìn)行治療和預(yù)防，這樣可以在一定程度上減少抗生素的使用，提高養(yǎng)殖品種的存活率。而且建立起的檢測方法還可以用于水產(chǎn)品的安全檢測，避免食物中的溶藻弧菌對人類健康造成威脅。
　　 免疫磁珠分離技術(shù)(immunomagnetic separation，MS)是以免疫磁珠為基礎(chǔ)發(fā)展起來的免疫檢測技術(shù)，是以

3、抗體包被的磁珠為載體，利用抗原抗體的特異性反應(yīng),在反應(yīng)體系中形成抗原-抗體磁珠復(fù)合物，該復(fù)合物在磁場的作用下做定向運(yùn)動(dòng)，從而達(dá)到分離抗原的作用。免疫磁珠分離技術(shù)不僅兼具固相化試劑特有的優(yōu)點(diǎn)和免疫學(xué)反應(yīng)的高度專一性等特點(diǎn)，而且分離時(shí)間短、速度快、分離效率高，不影響被分離生物材料的生物學(xué)性狀和功能，因此成為近年來國內(nèi)外比較熱門的一種新的免疫學(xué)技術(shù)，并在生物大分子與細(xì)胞的分離檢測方面表現(xiàn)出廣闊的應(yīng)用前景。本研究就是以該技術(shù)為基礎(chǔ)，建立快速、高

4、效的溶藻弧菌免疫磁珠快速檢測技術(shù)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
　　 1）通過石碳酸滅活法制備溶藻弧菌抗原，用以免疫新西蘭大白兔，頸動(dòng)脈取血法共收集150mL抗血清，其凝集效價(jià)為1:5120。通過蛋白A柱親和層析法從10mL抗血清純化出濃度為2.8579mg/mL的兔抗溶藻弧菌IgG共40mL。改良ELISA法測定IgG的效價(jià)為1:256000。
　　 2）利用ELISA法檢測溶藻弧菌兔抗IgG的包被效果。結(jié)果為2μL免疫磁珠的最大結(jié)