溶藻弧菌重要外膜蛋白免疫識別層次的研究.pdf

1、由于細(xì)菌耐藥性的危害逐步凸現(xiàn)，疫苗作為細(xì)菌性疾病的有效防治手段其優(yōu)勢不斷顯現(xiàn)，地位不斷提升。革蘭氏陰性菌作為病原菌的一個(gè)重要組成部分，對人類的生產(chǎn)、生活都具有很大的危害，運(yùn)用免疫蛋白質(zhì)組學(xué)的相關(guān)理論與方法，能夠高通量、高效率的篩選與鑒定革蘭氏陰性菌的外膜蛋白(outer membrane proteins，OMPs)中具有較強(qiáng)的免疫識別作用的顯性免疫原，可以通過對免疫原中和能力的比較評價(jià)最佳的疫苗候選靶位。 本論文克隆表達(dá)了4個(gè)

2、革蘭氏陰性菌中的重要致病菌種—溶藻弧菌的外膜蛋白，同時(shí)利用實(shí)驗(yàn)室已有的22種溶藻弧菌外膜蛋白的克隆表達(dá)株共26個(gè)重要的溶藻弧菌的外膜蛋白，運(yùn)用免疫蛋白質(zhì)組學(xué)與基因工程等相關(guān)理論與技術(shù)，進(jìn)行免疫原層次識別分析的研究。通過試驗(yàn)論證了，在同等條件下，不同抗原對宿主具有不同強(qiáng)度的抗原反應(yīng)，而且同時(shí)作用于宿主的抗原具有相互競爭與抑制的特征，發(fā)現(xiàn)了這26個(gè)溶藻弧菌重要外膜蛋白之間相互競爭與抑制的關(guān)系，初步構(gòu)建了相應(yīng)的免疫識別層次，為研制致病菌疫苗的

3、候選靶標(biāo)提供了新的有效的途徑與方法，使細(xì)菌性疾病防治疫苗的研制更加有效、有針對性，因此具有非常重要的理論與現(xiàn)實(shí)意義。 本論文根據(jù)溶藻弧菌與副溶血弧菌的具有高度親緣關(guān)系，按GenBank中副溶血弧菌的基因序列，設(shè)計(jì)了4對外膜蛋白的基因引物，以溶藻弧菌基因組DNA為模板，采用PCR技術(shù)擴(kuò)增獲得4個(gè)基因，進(jìn)一步以pET—32a質(zhì)粒為載體，構(gòu)建出相應(yīng)的4種重組質(zhì)粒，在E.coliBL21菌株中進(jìn)行表達(dá)。純化并定量了包括實(shí)驗(yàn)室已有的22個(gè)

4、外膜蛋白共26個(gè)溶藻弧菌的重要外膜蛋白。 勾畫出26個(gè)溶藻弧菌重要外膜蛋白的免疫保護(hù)層次，第一免疫保護(hù)層次為：VA1440，VPA1745，VA2309，VPA1186，VA2241，VA1267，VA0741；第二免疫保護(hù)層次為：VA0449，VA0764，OmpV，OmpR，VPA0860，VA0802，VPA1615：第三免疫保護(hù)層次為：VA2265，VPA0225，VA0425。初步闡明26個(gè)溶藻弧菌外膜蛋白之間相互競爭