基于免疫磁珠的痕量黃曲霉毒素B1快速富集及ELISA檢測的研究.pdf

1、黃曲霉毒素B1(Aflatoxin B1，AFB1)是一種有毒的次級代謝產物，世界癌癥機構將其歸類為Ⅰ類致癌物，而作為中國傳統(tǒng)發(fā)酵食品的醬油卻廣泛存在不同程度的黃曲霉毒素B1污染。研究表明，即使是痕量的黃曲霉毒素B1，長期的攝入也存在很大的危險性。所以建立一種快速檢測AFB1的方法具有重要意義，特別是對于痕量的AFB1樣品的檢測。
　　 通過優(yōu)化抗體的偶聯(lián)條件和黃曲霉毒素B1的前處理條件，成功建立了醬油中的免疫磁珠富集方法，結合

2、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)定量檢測黃曲霉毒素B1。該方法所用的總時間為2h，最佳條件如下:pH7.40.02M PB緩沖液作為偶聯(lián)體系，抗體與磁珠的比例為55μg/mg，20％的甲醇-PBS作為AFB1的前處理體系。以ELISA作為檢測方法，在0.05μg/kg～0.3μg/kg AFB1的范圍內具有良好的線性關系(R2=0.9842)。在醬油中添加0.5μg/kg～7μg/kg黃曲霉毒素B1的平均加標回收率為83.6％～104％，相

3、對標準偏差為4.2％～11.7％。同時評價了兩種不同方式制備的免疫磁珠在醬油中富集AFB1的效果，分別是直接法和間接法。直接法是抗黃曲霉毒素B1單克隆抗體直接偶聯(lián)到磁珠表面所制備的免疫磁珠;間接法是生物素化的抗黃曲霉毒素B1單克隆抗體偶聯(lián)到鏈霉親和素磁珠表面所制備的免疫磁珠。結果表明，直接法免疫磁珠的抗體偶聯(lián)率高于間接法免疫磁珠的抗體偶聯(lián)率，但間接法免疫磁珠在用量更少的條件下，對AFB1回收效果高于直接法的免疫磁珠，特別是對于痕量的AF

4、B1樣品。對于含5ng的AFB1醬油樣品，直接法的免疫磁珠需要0.5mg的用量，而間接法的免疫磁珠只需要0.3mg用量。
　　 免疫磁分離法作為醬油的前處理方法，與傳統(tǒng)的有機溶劑萃取法和免疫親和柱法作了比較。結果表明，免疫磁分離法所用的時間最短，而且AFB1回收率高，特別是對于痕量的AFB1樣品。由于免疫磁分離法是基于一種動態(tài)的熱力學反應過程，相比其它的前處理方式，該方法具有很大的優(yōu)勢。相對于傳統(tǒng)的有機溶劑萃取法，該方法具有回收