龍血竭對大鼠撕脫皮瓣保護(hù)作用的研究

1、龍血竭對大鼠撕脫皮瓣保護(hù)作用的實驗研究羅志紅1魯開化2★張榮平3王繼華4胡煒彥3康文博2王師平2(1.昆明醫(yī)學(xué)院2007級博士研究生，昆明605000；成都軍區(qū)昆明總醫(yī)院附屬中醫(yī)院，昆明6500322.第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院全軍整形外科研究所，西安710032；3.昆明醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，昆明605000；4.昆明醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院整形外科昆明650101；）摘要摘要目的：目的：探討龍血竭對大鼠撕脫皮瓣的保護(hù)作用及機(jī)制。方法：方法：實驗大鼠隨機(jī)

2、分為空白對照組、龍血竭灌胃組、龍血竭外用組。在大鼠背部制作一個蒂在尾部的3cm9cm大小的撕脫傷皮瓣，皮瓣碾壓撕脫后原位縫合。分別于術(shù)后1h、12h、24h取皮瓣近、中、遠(yuǎn)段組織檢測丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)及髓過氧化物酶(MPO)活性，術(shù)后7天計算皮瓣成活率。結(jié)果：結(jié)果：龍血竭能降低MDA含量和MPO活性，增加SOD活性。術(shù)后7天皮瓣成活率龍血竭組明顯升高。結(jié)論：結(jié)論：龍血竭可提高撕脫皮瓣組織的抗氧化能力，減輕中性

3、粒細(xì)胞在皮瓣中的聚集，從而發(fā)揮對撕脫皮瓣的保護(hù)作用。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞：龍血竭撕脫皮瓣丙二醛超氧化物歧化酶髓過氧化物酶中圖分類號：中圖分類號：文獻(xiàn)標(biāo)志碼：文獻(xiàn)標(biāo)志碼：皮膚撕脫傷是臨床常見的創(chuàng)傷之一組織壞死機(jī)理復(fù)雜，臨床缺乏有效的防治方法。近年來大量研究表明自由基在常規(guī)皮瓣缺血壞死中起著十分重要的作用撕脫皮瓣也存在著與常規(guī)皮瓣壞死類似的因素課題組在前期的實驗研究中也發(fā)現(xiàn)皮膚撕脫傷后組織中脂質(zhì)過氧化反應(yīng)增強(qiáng)說明自由基在撕脫皮瓣壞死中可能發(fā)揮重要的

4、作用[1]。龍血竭是傳統(tǒng)名貴中藥為龍舌蘭科劍葉龍血樹脂提煉的純天然藥物臨床應(yīng)用廣泛特別是在創(chuàng)傷修復(fù)方面療效顯著?，F(xiàn)代研究證實，血竭具有能改善局部血循環(huán)，抑制血小板聚集，抗血栓形成，清除自由基和抗氧化作用，促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖，促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞的游走、增殖，抗細(xì)菌、抗真菌及消炎止痛等多種藥理活性[24]。但龍血竭對撕脫皮瓣影響的實驗研究目前尚無文獻(xiàn)報道。本實驗采用大鼠撕脫傷模型檢測龍血竭對大鼠皮瓣撕脫傷后組織中SOD、MDA、MPO的影響探

5、討龍血竭對撕脫皮瓣損傷的保護(hù)作用。1材料和方法材料和方法1.11.1龍血竭外用藥的制備：龍血竭外用藥的制備在昆明醫(yī)學(xué)院天然藥物藥理實驗室完成，龍血竭粉（昆明醫(yī)學(xué)院天然藥物藥理實驗室提供）配制成濃度為10%的外用制劑。1.21.2實驗動物及主要試劑、儀器：SD大鼠75只（雌雄不限），體重220mg250mg，購于第四軍醫(yī)大學(xué)動物實驗中心。皮膚撕脫傷模型機(jī)（由第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院整形外科研究所研制）；丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD

6、)、髓過氧化物酶(MPO)測試盒（南京建成生物工程研究所）。2方法方法2.1大鼠撕脫傷皮瓣模型的制備：1％戊巴比妥納（40mgkg1）ip麻醉，剃毛機(jī)剃除背部的毛后用硫化鈉脫毛，皮膚常規(guī)消毒后以背部中線為準(zhǔn)，蒂為于尾側(cè)，設(shè)計3cm9cm大小的長條形任意皮瓣，切開皮膚至肉膜，在肉膜下掀起皮瓣，然后將皮瓣放置于大鼠皮膚撕脫傷模型機(jī)固定底板與齒輪之間，調(diào)節(jié)二者合適高度，確保對皮瓣產(chǎn)生基本相同的壓力；使齒輪旋轉(zhuǎn)并從皮瓣的遠(yuǎn)端向蒂部快速滑動，對皮

7、瓣形成撕脫傷。重復(fù)碾壓4次。將皮瓣復(fù)位后用50絲線原位縫合。2.2實驗分組：將大鼠隨機(jī)分為3組：空白對照組(A）、龍血竭灌胃組(B）、龍血竭外用組(C)，每組25只，在撕脫皮瓣形成后原位縫合，術(shù)后B、C組分別給予龍血竭灌胃（2gkg1每日2次）、龍血竭外用（16gkg1，每日3次）。連續(xù)給藥7天。[通訊作者]：魯開化第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院全軍整形外科研究所，教授，博士生導(dǎo)師，Tel:13809186698Email:lukaihua@fm

8、mu.12h379.5636.65398.3444.311）2）357.2445.431）2）24h321.4530.36328.4445.451）2）289.4344.311）2）注：與對照組比較，1）P﹤0.05；與灌藥組比較，2）P﹤0.05；表3各組皮瓣組織術(shù)后各組皮瓣組織術(shù)后1h1h、12h12h、24hMPO24hMPO活性檢測活性檢測（sUg）x組別時間近段中段遠(yuǎn)段對照組1h4.920.235.450.237.750.25

9、12h7.170.328.260.2510.510.3324h9.450.2510.840.3614.750.42灌藥組1h4.880.275.280.317.660.2612h6.050.241）6.530.351）8.780.361）24h7.140.211）8.880.431）11.230.321）外用藥組1h4.830.225.370.267.890.4412h4.350.252）3）4.790.322）3）6.020.242）

10、3）24h5.170.352）3）5.970.222）3）8.450.452）3）注：與對照組比較，1）P﹤0.05，2）P﹤0.01；與灌藥組比較，3）P﹤0.05表4大鼠皮瓣術(shù)后大鼠皮瓣術(shù)后7天成活率天成活率(s%)x組別例數(shù)術(shù)后第7天對照組1039.757.45灌藥組1049.586.161）外用藥組1065.456.282）3）注：與對照組比較，1）P﹤0.05，2）P﹤0.01；與灌藥組比較，3）P﹤0.054討論討論皮膚撕脫

11、傷后撕脫皮瓣存在缺血再灌注過程撕脫傷造成組織內(nèi)和撕脫皮瓣下廣泛出血撕脫組織內(nèi)大量炎細(xì)胞浸潤血管栓塞和變性壞死這些都為氧自由基的產(chǎn)生創(chuàng)造了條件[5]。自由基具有極為活潑的反應(yīng)性它可與細(xì)胞成分如細(xì)胞膜磷脂、蛋白質(zhì)、核酸等發(fā)生反應(yīng)最終使細(xì)胞膜的完整性遭到破壞進(jìn)一步使細(xì)胞的功能代謝也發(fā)生障礙。超氧化物歧化酶(SOD)是體內(nèi)重要的抗氧化酶當(dāng)體內(nèi)自由基生成增多時它與超氧陰離子反應(yīng)生成過氧化氫再由過氧化氫酶和谷胱甘肽酶轉(zhuǎn)變成水從而使自由基清除保護(hù)細(xì)胞

12、免受損傷。自由基通過脂質(zhì)過氧化反應(yīng)生成脂質(zhì)過氧化物(LPO)丙二醛(MDA)是脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的終產(chǎn)物之一，與自由基代謝密切相關(guān)測定MDA的含量可代表LPO的含量也能反應(yīng)自由基產(chǎn)生的多少。本研究發(fā)現(xiàn)與對照組比較，龍血竭灌胃組和外用組均能降低MDA水平，提高SOD水平，其中以外用藥組明顯，說明龍血竭可以減少自由基的產(chǎn)生，保護(hù)SOD活力，從而提高組織清除氧自由基的能力。中性粒細(xì)胞髓過氧化物酶(MPO)是中性粒細(xì)胞的標(biāo)志酶，直接與中性粒細(xì)胞的數(shù)

13、目相關(guān)。因此可以通過檢測皮瓣組織中的MPO活性來檢測中性粒細(xì)胞在皮瓣組織中的浸潤、聚集情況。大量研究表明中性粒細(xì)胞聚集是加重皮瓣缺血損傷的重要因素。本實驗在術(shù)后1h、12h、24h檢測皮瓣組織中MPO的活性發(fā)現(xiàn)，MPO活性遠(yuǎn)段最高，中段次之，近段最低，這反映出中性粒細(xì)胞在皮瓣缺血最重的區(qū)域聚集最多，這種現(xiàn)象與中性粒細(xì)胞參與到缺血皮瓣損傷的機(jī)理學(xué)說相吻合。實驗發(fā)現(xiàn)術(shù)后12h、24h，龍血竭灌胃組與外用組皮瓣組織中MPO活性均低于對照組，其