果蔬籽中還原型谷胱甘肽(GSH)和蛋白巰基(P-SH)含量的測定.pdf

1、生物體內(nèi)含有多種抗氧化劑，其中含半胱氨酸殘基的巰基化合物在維持生物體內(nèi)氧化還原氛圍中起到了不可替代的作用。據(jù)文獻報道;生物體內(nèi)的巰基化合物含量水平于與眾多疾病緊密相連，其含量高低也成為了許多病理條件的一個判斷標(biāo)志。由于生活節(jié)奏的日益加速，大多數(shù)人時常處在高壓力的狀態(tài)，這也刺激人體內(nèi)活性氧自由基的過量增加，從而加速機體的衰老，與此同時過量的活性氧自由基也易于誘發(fā)基因突變導(dǎo)致癌癥等惡性疾病的產(chǎn)生。另據(jù)研究表明;人體通過攝入外源性抗氧化劑，像

2、還原型谷胱甘肽(GSH)，N-乙?；?半胱氨酸等含巰基化合物，可明顯提高人體血液內(nèi)的GSH含量水平，這對提高機體抗病能力、保健均具有重要的作用[1]。因此，開發(fā)一種準(zhǔn)確、靈敏、經(jīng)濟又快速的測定含半胱氨酸殘基的巰基化合物含量的分析方法，并以此來篩選富含巰基化合物的各類食材作為外源性抗氧化補充劑，這對防病、治病等方面具有實際意義。
　　本研究利用對巰基具有選擇性的、并與其定量衍生化的衍生化試劑5，5'-二硫雙-2-硝基苯甲酸(DTNB

3、)，用含過量衍生化試劑的提取液，采用細胞破壁、衍生化為一體的前處理方法，分別用HPLC法和光譜法實時測定了果蔬籽中GSH和P-SH含量，并從中篩選出了四種富含GSH和蛋白巰基的果蔬籽。HPLC測定結(jié)果發(fā)現(xiàn)，柚子籽、南瓜籽、黃瓜子、冬瓜子中含較豐富的GSH和蛋白巰基(P-SH)，其中柚子籽中GSH和P-SH巰基含量分別為1.7304μmol/g(GSH)，1.2028μmol/g(P-SH)，南瓜籽含量分別為1.0445μmol/g(GS

4、H)和1.8878μmol/g(P-SH)。黃瓜籽和冬瓜籽中未檢測到GSH等小分子巰基化合物，但含相對豐富的蛋白巰基(P-SH)，其含量分別為4.0325μmol/g和4.1623μmol/g。對所選定的果蔬樣品也分別采用文獻已報道的熒光分光光度法和紫外-可見分光光度法進行了比較測定，發(fā)現(xiàn)熒光光度法測定GSH含量和紫外-可見分光光度法測定結(jié)果略微偏離色譜測定結(jié)果，這可能是由于樣品中的共存組分對GSH的測定有一定的光譜干擾。本研究中采用的

5、HPLC測定方法的回收率在99.92％-101.32％之間，GSH和P-SH測定檢測限分別為0.1384μmol/g和0.2184μmol/g，基本滿足準(zhǔn)確測定的要求。
　　由于生物樣品成分復(fù)雜，在果蔬籽中含有大量的不飽和脂肪酸、黃酮類物質(zhì)、維生素和礦物質(zhì)等。為了探討果蔬籽中其他化學(xué)成分對實驗測定結(jié)果的影響，在本研究中將柚子籽和南瓜籽作為樣品，采用高效液相色譜法和光譜法分別對黃酮類化合物和不飽和脂肪酸對色譜和光譜測定干擾進行了探究