還原型谷胱甘肽在二噁英致腭裂模型中的作用研究.pdf

1、非綜合征型唇腭裂是新生兒頜面部的主要先天性畸形，是遺傳和環(huán)境因素相互作用所致的多基因遺傳病其病因仍未完全明確。唇腭裂將直接影響患兒的進(jìn)食、吞咽、語(yǔ)音及呼吸功能，甚至頜骨發(fā)育和心理也會(huì)受到極大影響，手術(shù)是目前治療腭裂的唯一有效方法，但術(shù)后仍可遺留不同程度的畸形，給患兒和家屬造成極大的心理創(chuàng)傷和精神負(fù)擔(dān)。因此，研究腭裂發(fā)病機(jī)制，在胎兒發(fā)育中有效預(yù)防其發(fā)生顯得尤為重要。前人為了研究唇腭裂，建立了很多穩(wěn)定的唇腭裂模型，如激素致畸模型，二惡英致畸

2、模型等。環(huán)境因素作為現(xiàn)在唇腭裂發(fā)病因素中可干預(yù)的因素顯得額外重要，環(huán)境因素中2，3，7，8-四氯二苯并二噁英(TCDD)作為現(xiàn)在研究最熱門(mén)的鹵代烴化合物是一種有毒化合物廣泛存在，主要源于塑料垃圾焚燒、電子回收、農(nóng)藥應(yīng)用及紙漿漂白。一旦暴露其中，會(huì)導(dǎo)致胚胎畸形發(fā)生、免疫抑制、致死及其他毒性反應(yīng)本實(shí)驗(yàn)利用環(huán)境因素中2，3，7，8-四氯二苯并二惡英(TCDD)致胎鼠腭裂模型進(jìn)行研究。
　　芳香烴受體通過(guò)特異性調(diào)節(jié)CYP1A1的表達(dá)發(fā)揮其

3、功能，CYP1A1作為一種細(xì)胞色素氧化酶廣泛表達(dá)在大多數(shù)哺乳動(dòng)物幾乎所有組織中，其中CYP1A1可以酶解環(huán)境中的多環(huán)芳烴，其代謝產(chǎn)物高度致畸性。由芳香烴受體直接調(diào)節(jié)誘導(dǎo)CYP1A1產(chǎn)生的原始目的基因的轉(zhuǎn)錄，CYP1A1與其他細(xì)胞色素酶一起參與內(nèi)源性物質(zhì)或者外源性物質(zhì)的代謝而可以增加了活性氧調(diào)節(jié)的氧化應(yīng)激反應(yīng)。二惡英聯(lián)合抗氧化劑比如維生素E，琥珀酸或者鞣花酸可以顯著降低其胎兒生長(zhǎng)緩慢和胎鼠高死亡率等不良并發(fā)癥。芳香烴受體介導(dǎo)的致畸毒性是否

4、是活性氧介導(dǎo)的氧化應(yīng)激帶來(lái)的結(jié)果至今沒(méi)有明確解釋。
　　目的:
　　在二噁致腭裂模型中打破還原型谷胱甘肽的穩(wěn)態(tài)，觀察還原型谷胱甘肽穩(wěn)態(tài)的改變是否會(huì)對(duì)腭中嵴上皮細(xì)胞形態(tài)及腭裂發(fā)生率產(chǎn)生影響，探究氧化自由基在TCDD致畸過(guò)程中是否能起到主導(dǎo)作用，為腭裂的環(huán)境致畸因素提供預(yù)防的理論依據(jù)。
　　材料和方法:
　　本實(shí)驗(yàn)采用SPF級(jí)C57BL/6J小鼠。將GD10天的孕鼠C57BL/6J隨機(jī)分成4組，TCDD組:腹腔注射生

5、理鹽水和四氯二苯二噁英(TCDD)灌胃;TCDD+BSO組:腹腔注射丁硫氨酸-亞砜胺(BSO)和四氯二苯二噁英(TCDD)灌胃;BSO組腹腔注射丁硫氨酸-亞砜胺(BSO)和玉米油灌胃;對(duì)照組:腹腔注射生理鹽水和玉米油灌胃。光學(xué)顯微鏡和電子掃描電鏡下觀察胎鼠GD13.5、GD14、GD14.25、GD14.5、GD14.75、GD15天腭胚突的發(fā)育及細(xì)胞表面形態(tài)。統(tǒng)計(jì)各組小鼠在GD17的腭裂發(fā)生率。免疫組化檢測(cè)各組腭中嵴上皮各時(shí)期CYP1

6、A1蛋白表達(dá)情況。統(tǒng)計(jì)分析檢測(cè)還原型谷胱甘肽穩(wěn)態(tài)的改變是否給二噁英腭裂模型帶來(lái)質(zhì)的變化。
　　結(jié)果:
　　1、TCDD成功構(gòu)建高致畸率的腭裂模型。
　　2、丁硫氨酸-亞砜胺(BSO)增加了腭裂的發(fā)生率，但是相對(duì)正常對(duì)照組并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　3、TCDD組腭胚突上抬時(shí)間較對(duì)照組推遲1天，添加BSO的TCDD組腭胚突上抬過(guò)程較正常組減慢，但最后上抬的時(shí)間未變。
　　4、電鏡下胚胎發(fā)育的各發(fā)育時(shí)

7、期，腭中嵴上皮表面TCDD組與對(duì)照組有明顯差異。TCDD組CYP1A1表達(dá)明顯增多。
　　5、TCDD組腭中嵴上皮可見(jiàn)CYP1A1的高表達(dá)，正常組腭中嵴上皮融合過(guò)程中可見(jiàn)CYP1A1的表達(dá)。
　　結(jié)論:
　　低劑量的TCDD可誘導(dǎo)腭裂的發(fā)生。TCDD致腭裂模型中，CYP1A1的高表達(dá)意味著在此過(guò)程中存在大量的氧化應(yīng)激反應(yīng)，相對(duì)于正常組的低表達(dá)或不表達(dá)，TCDD組中腭裂的發(fā)生發(fā)展與CYP1A1存在聯(lián)系;人為消耗還原型谷胱