高效液相色譜法在中草藥黃酮類化合物和水中有機磷農(nóng)藥分析中的應(yīng)用研究.pdf

1、高效液相色譜法(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)具有高壓、高效、高靈敏度、操作簡單等優(yōu)點，在現(xiàn)代分析領(lǐng)域如食品衛(wèi)生、環(huán)境安全、石油化工、天然產(chǎn)物、生物工程等方面具有非常廣泛的應(yīng)用。高效液相色譜的分離原理是利用分析物在固定相上的吸附、解吸速率差異，色譜柱對不同分析物的保留時間不一樣，使各成分依次流出色譜柱而達到分離的目的。在進行高效液相色譜分析之前，需要對分析樣品進行適當?shù)那疤幚?，?/p>

2、且前處理的好壞直接影響檢測的靈敏度和準確性。近年來，許多樣品前處理技術(shù)被開發(fā)出來并用于實際樣品的分析，綠色、簡單、快速的前處理方法一直是廣大研究者致力于發(fā)展的方向。
　　本文由兩部分構(gòu)成：緒論部分和研究報告。第一部分緒論論述了高效液相色譜、中草藥和樣品前處理的發(fā)展和應(yīng)用情況。第二部分研究報告建立了三味中藥中黃酮和有機酸以及水樣中有機磷農(nóng)藥殘留的提取分離方法。
　　1.高效液相色譜法同時分離石韋中綠原酸、槲皮素和山柰酚

3、　　以甲醇作為萃取劑，建立超聲波萃取-高效液相色譜法分離和測定石韋中綠原酸、槲皮素和山柰酚的方法。采用Phenomenex C18色譜柱(250mm×4.6mm,5μm)；流動相為甲醇和pH＝3.0的冰醋酸混合溶液，設(shè)置梯度洗脫程序、1.0mL/min的流速、254nm的紫外檢測波長和35℃的柱溫。結(jié)果三種化合物在0.00024～3.00μg(綠原酸)、0.00016～2.00μg(槲皮素)、0.00016～2.00μg(山柰酚)之間線

4、性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)r均為0.9999。綠原酸、槲皮素和山柰酚的最低檢出限(S/N＝3)依次為3.29、0.43、0.33ng/mL，加標回收率分別為97.73％、98.07%、96.92%。本方法前處理簡單、分析時間短、測定準確、靈敏度高，為石韋中綠原酸、槲皮素、山柰酚三種成分的分離和定量提供了實驗依據(jù)。
　　2.超聲波輔助萃取-高效液相色譜測定翻白草中7種黃酮和有機酸
　　基于超聲波輔助萃取技術(shù)，利用高效液相色譜法分離和

5、測定翻白草中的7種黃酮和有機酸(綠原酸、咖啡酸、金絲桃苷、槲皮素、柚皮素、山柰酚和芹菜素)。利用Phenomenex C18色譜柱（150mm×4.6mm,5μm）完成綠原酸、咖啡酸、金絲桃苷、槲皮素、柚皮素、山柰酚和芹菜素的分離；流動相為甲醇-0.1%的乙酸水溶液，進行梯度洗脫；流速1.0mL/min，紫外測定波長350nm，柱溫40℃。7在20min內(nèi)完成7種黃酮和有機酸的色譜分離，并且獲得了滿意的線性方程（r＞0.9995，n=7

6、），樣品的平均回收率為84.61%～104.06%（RSD小于4.77）。最終確定黃酮和有機酸的最佳提取條件為：用100倍量的80%甲醇溶液超聲時間20min。對翻白草樣品的分析表明每0.1g樣品中含有：綠原酸12.15μg、咖啡酸6.0μg、金絲桃苷12.7μg、槲皮素10.8μg、柚皮素29.4μg、山柰酚6.1μg和芹菜素11.4μg。
　　3.益母草中8種有效成分的超聲提取和含量測定
　　建立了益母草中丁香酸、阿魏酸

7、、蘆丁、大豆素、槲皮素、橙皮素、山柰酚和芹菜素8種有效成分黃酮和有機酸的超聲提取和含量測定的方法。InertSustain C18(150mm×4.6mm,5μm)色譜柱用于分離益母草中的8種有效成分；選用甲醇和pH=3.0的乙酸水溶液作為流動相梯度洗脫。流速大小為1.0mL/min；定量分析波長為285nm；柱溫設(shè)置為35℃；進樣體積20μL。在最優(yōu)條件下8個成分達到完全分離，繪制的標準曲線具有良好的線性，相關(guān)系數(shù)均在0.9991(n

8、=7)以上。加標平均回收率(n=3)在89.93%～102.01%之間，相對標準偏差為1.17%～3.11%。實驗表明本方法容易操作、分析速度快、準確，為中藥益母草的質(zhì)量控制提供了依據(jù)。
　　4.固相萃取結(jié)合分散液液微萃取測定水樣中的四種有機磷農(nóng)藥
　　建立了水中四種有機磷農(nóng)藥（水胺硫磷、甲基對硫磷、三唑磷和殺螟硫鱗）的測定方法。樣品水溶液依次用固相萃取和分散液液微萃取富集其中的目標分析物，處理得到的萃取溶液進行高效液相色譜

9、分析。影響萃取效果的因素，包括洗脫溶劑種類和用量、樣品溶液的流速、鹽濃度、萃取溶劑的類型和用量、樣品溶液pH值都進行了優(yōu)化。實驗結(jié)果表明甲醇作為洗脫溶劑、二氯乙烷作為萃取溶劑效果最佳。在優(yōu)化的條件下，100mL水樣經(jīng)過固相萃取富集目標物，用1mL的甲醇作為洗脫劑。在樣品加標實驗中，獲得了較高的富集因子和滿意的回收率(大于86.9%)，檢測限為0.021-0.15μg/L。0.5μg/L的加標樣品溶液的相對標準偏差在1.9-6.8%(n=