紅翎菜科三種海藻原生質(zhì)體分離培養(yǎng)及外植體發(fā)育模式研究.pdf

1、紅翎菜科海藻是生產(chǎn)卡拉膠的主要原料，被廣泛應(yīng)用于紡織品、食品等方面，此外還具有很高的藥用價(jià)值、經(jīng)濟(jì)價(jià)值及重要的生態(tài)意義。紅翎菜科海藻大部分為野生種，野生資源也日益減少，目前，我國(guó)卡拉膠原料藻仍主要依賴于東南亞國(guó)家進(jìn)口，開展紅翎菜科海藻苗種繁育技術(shù)和遺傳改良研究工作已成為我國(guó)卡拉膠產(chǎn)業(yè)自主發(fā)展的急需。
　　 原生質(zhì)體的分離培養(yǎng)是一類重要的植物細(xì)胞工程研究技術(shù)。原生質(zhì)體無(wú)細(xì)胞壁障礙，是一類重要的生物學(xué)研究工具材料，可廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生

2、物學(xué)、體細(xì)胞雜交育種、遺傳轉(zhuǎn)化以及基因定位等研究。海藻原生質(zhì)體的分離制備多采用酶法，鑒定常采用熒光增白劑染色法和Evans Blue染色法。本文選取紅翎菜科兩種生態(tài)型的長(zhǎng)心卡帕藻(Kappaphycus alvarezii)和麒麟菜(Eucheuma denticulatum)共三種海藻的幼嫩藻體，運(yùn)用纖維素酶、鮑酶和海螺酶進(jìn)行酶解，均成功制得原生質(zhì)體，其中20％鮑酶與12％纖維素酶混合酶制得的原生質(zhì)體產(chǎn)量達(dá)到105個(gè)/g以上，分別為(

3、64.20±2.80)×104個(gè)/g、(76.80±3.20)×104個(gè)/g和(67.80±2.40)×104個(gè)/g，顯示出纖維素酶與鮑酶這一工具酶組合對(duì)原生質(zhì)體高效制備的良好適用性。在2.0 mol/L葡萄糖滲透劑、30℃黑暗酶解4.0 h的最適酶解條件下，長(zhǎng)心卡帕藻原生質(zhì)體存活率為(49.34±0.12)％。相較于前人研究，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果在酶解效率和產(chǎn)量上均有非常顯著的提高。
　　 海藻細(xì)胞具有全能性，在適當(dāng)條件下，細(xì)胞、組織均

4、可以分化發(fā)育為新個(gè)體，這為研究海藻的形態(tài)發(fā)生、遺傳育種及生活史控制等問(wèn)題開辟了新的途徑，并可通過(guò)體細(xì)胞及組織快繁培育經(jīng)濟(jì)海藻苗種。本文對(duì)長(zhǎng)心卡帕藻(Kappaphycusalvarezii)原生質(zhì)體進(jìn)行了再生培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)心卡帕藻原生質(zhì)體有體細(xì)胞團(tuán)和再生植株兩種發(fā)育分化途徑，并獲得原生質(zhì)體細(xì)胞再生苗。在長(zhǎng)心卡帕藻酶解后的組織塊和外植體再生培養(yǎng)研究中，發(fā)現(xiàn)酶解后的組織塊出現(xiàn)兩種發(fā)育途徑：一種是酶解后組織塊進(jìn)行了再生新芽的發(fā)育，即在培養(yǎng)65