苧麻原生質(zhì)體培養(yǎng)技術(shù)研究.pdf

1、本課題旨在通過(guò)研究影響苧麻原生質(zhì)體培養(yǎng)的主要因素，建立一套原生質(zhì)體培養(yǎng)直至得到再生植株的高效而完善的體系。主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下： 1．原生質(zhì)體分離與純化影響因子 苧麻子葉原生質(zhì)體分離的最適滲透壓調(diào)節(jié)劑(甘露醇)濃度因基因型不同而不同，“5041-3”為11％，“萬(wàn)載銅皮青”、“瑞昌細(xì)葉綠”、“廣西黑皮蔸”、“印度苧麻”、“1690”等為9％；酶液組合纖維素酶3.0％+果膠酶0.5％酶解9 h和纖維素酶1.0％+半纖維素

2、酶2.0％+離析酶1.0％酶解12 h酶解效果最好。 對(duì)苧麻子葉暗處理和生長(zhǎng)素預(yù)處理結(jié)果顯示，材料經(jīng)預(yù)處理后，酶解更加充分，原生質(zhì)體產(chǎn)量提高，原生質(zhì)體內(nèi)含物相對(duì)減少。暗培養(yǎng)少于24 h產(chǎn)量和活力提高效果不明顯，處理36h效果最好，超過(guò)72 h原生質(zhì)體產(chǎn)量和活力急劇下降；生長(zhǎng)素處理效果36h最理想。 2．原生質(zhì)體培養(yǎng) 固液雙層培養(yǎng)和海藻酸鈉包埋培養(yǎng)效果較液體淺層培養(yǎng)理想，污染率低，更有利于原生質(zhì)體的細(xì)胞壁再生和細(xì)胞

3、分裂增殖。 子葉原生質(zhì)體在附加NAA(0.5 mg/L)、NAA(0.5 mg/L)+BA(1.0 mg/L)、2,4-D(0.5 mg/L)+KT(0.5 mg/L)、2,4-D(0.5 mg/L)+KT(1.0 mg/L)的KM<,8>P培養(yǎng)基中，均發(fā)生了二次分裂，但沒(méi)有進(jìn)一步的分裂。 3．苧麻體細(xì)胞胚胎發(fā)生研究 本研究采用苧麻子葉為外植體，獲得了類型豐富的愈傷組織，其中淺黃色或黃綠色、顆粒狀疏松的愈傷組織有

4、可能產(chǎn)生體細(xì)胞胚。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，基因型和材料的生理狀況影響體細(xì)胞胚胎發(fā)生能力；生長(zhǎng)素是苧麻組織培養(yǎng)所必需的，且以濃度不超過(guò)1 mg/L的2,4-D和CPA為好；細(xì)胞分裂素以油菜素內(nèi)酯效果最好。培養(yǎng)基中附加Gln、Asn、CH，可促進(jìn)愈傷組織增殖，但是增殖速度過(guò)快也不利于體細(xì)胞胚胎發(fā)生。不同基因型在相同的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中愈傷組織形態(tài)和分化能力差異很大。WZ愈傷組織增殖最快，最具胚胎發(fā)生潛力，而“廣西黑皮蔸”愈傷組織增殖量少，速度慢，且易褐化死亡。