苧麻原生質(zhì)體培養(yǎng)技術(shù)的研究.pdf

1、苧麻(BoehmerianiveaL.Gaud.)是蕁麻科(Urticaceae)苧麻屬(Boehmeria)多年生宿根性草本植物，也是我國(guó)的特產(chǎn)，在世界上素有“中國(guó)草”的美譽(yù)。苧麻是重要的紡織材料之一，具有良好的纖維紡織性能和穿著服飾性能，被公認(rèn)為“天然纖維之王”。另外，苧麻的葉、莖桿、根可開展多種綜合利用。我國(guó)已經(jīng)對(duì)苧麻的資源分布、引種栽培、系統(tǒng)選育與雜交育種、雜種優(yōu)勢(shì)與雄性不育、誘變育種，無(wú)性快繁、組織培養(yǎng)等方面做了較深入的研究。

2、但苧麻育種實(shí)踐中的兩個(gè)難題仍難以解決：一是傳統(tǒng)育種方法造成的育種周期過長(zhǎng)，二是品種混雜造成的原麻品質(zhì)降低。而生物工程則為生物品種的改造開辟了新途徑，把某些高產(chǎn)、抗逆或其他優(yōu)良性狀基因?qū)朐瓉?lái)不具備這些性狀的生物體內(nèi)，可以在較短時(shí)間達(dá)到改良品種的目的。本課題旨在通過研究影響苧麻原生質(zhì)體培養(yǎng)的主要因素，建立一套原生質(zhì)體培養(yǎng)直至得到再生植株的高效而完善的體系，為以后導(dǎo)入目的基因及細(xì)胞融合等遺傳操作，最終創(chuàng)造優(yōu)良的品種打下良好的基礎(chǔ)。其主要研究

3、內(nèi)容和結(jié)果如下： 1.不同來(lái)源的原生質(zhì)體游離材料的差異對(duì)苧麻種子而言，需要添加濃度高達(dá)3.0mg/L左右的2，4-D或KT才可以誘導(dǎo)出愈傷，但這些愈傷組織狀態(tài)較差，未能進(jìn)一步用作酶解游離原生質(zhì)體的材料。不同激素組合對(duì)于苧麻子葉、下胚軸的愈傷誘導(dǎo)率之間差異達(dá)到極顯著水平，KT和2,4-D各0.5mg/L的組合，對(duì)于苧麻的子葉、下胚軸啟動(dòng)脫分化有良好的效果。2，4-D0.5mg/L和KT1.0mg/L的組合，能誘導(dǎo)愈傷組織穩(wěn)定的增殖

4、，且愈傷顏色淡黃，顆粒疏松，在顯微鏡下觀察其細(xì)胞小而圓，胞質(zhì)濃厚，易于形成胚性細(xì)胞團(tuán)，可進(jìn)一步用于游離原生質(zhì)體。 2.基因型對(duì)苧麻愈傷組織誘導(dǎo)的影響華苧4號(hào)、湘苧2號(hào)、黔苧1號(hào)、瑞昌細(xì)葉綠、瀏陽(yáng)細(xì)葉綠、恩施青麻、1690的下胚軸均能誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織，但出愈率差異極顯著，且愈傷狀態(tài)也各有不同。華苧4號(hào)最適于在2，4-D0.5mg/L、KT1.0mg/L，GA30.2m/L的MSB培養(yǎng)基上誘導(dǎo)下胚軸形成愈傷，且愈傷組織狀態(tài)良好。

5、 3.懸浮細(xì)胞系繼代培養(yǎng)為保持活性，振蕩培養(yǎng)的懸浮細(xì)胞系7d就要進(jìn)行一次繼代。經(jīng)過3～4次繼代，在每個(gè)繼代周期內(nèi)培養(yǎng)第4～6d的材料最適宜分離原生質(zhì)體。 4.原生質(zhì)體分離苧麻子葉和懸浮細(xì)胞系分別用纖維素酶3.0％+離析酶0.5％及纖維素酶5.0％+果膠酶1.0％處理9h，原生質(zhì)體產(chǎn)量可以達(dá)到106個(gè)/ml，活力為88.6％～90.6％。 5.原生質(zhì)體培養(yǎng)子葉原生質(zhì)體在附加2，4-D0.5mg/L+NAA0.2mg/L