肉桂單寧提取分離純化及抗氧化活性研究.pdf

1、本論文以肉桂為原料,進(jìn)行了肉桂單寧的分析方法、提取、分離純化及抗氧化活性研究,主要研究?jī)?nèi)容和取得的成果如下:
　　(1)改進(jìn)了Folin-Denis法測(cè)定肉桂總酚的定量分析方法并建立了香草醛-硫酸法測(cè)定肉桂單寧的定量分析方法。
　　Folin-Denis法測(cè)定肉桂總酚的方法是:取樣液2 mL,依次加入Folin-Denis試劑1.0 mL、0.01 mol·L-1EDTA溶液2.0 mL以及1 mol·L-1NaOH溶液2.

2、5 mL,然后用蒸餾水定容至25 mL,混勻、靜置顯色20 min后,測(cè)定720 nm處吸光度,以單寧酸為標(biāo)準(zhǔn)品,制作單寧酸濃度與吸光度之間的標(biāo)準(zhǔn)曲線,線性方程為:A=22.0571c+0.0094(R2=0.9978)。穩(wěn)定性、精密度和準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果分別是:RSD=0.82％(20~40 min)、RSD=1.12%、RSD=2.31%(平均回收率為101.05%)。
　　香草醛-硫酸法測(cè)定肉桂單寧的方法是:取0.5 mL樣液,

3、依次加入質(zhì)量濃度為30 g·L-1香草醛-甲醇溶液以及體積分?jǐn)?shù)30%的硫酸-甲醇溶液各2.5 mL,于30℃下反應(yīng)20 min后,測(cè)定500 nm處吸光度。以兒茶素為標(biāo)準(zhǔn)品,繪制兒茶素濃度與吸光度的標(biāo)準(zhǔn)曲線,線性方程為:A=3.0153c+0.0050(R2=0.9997)。穩(wěn)定性、精密度和準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果分別是:RSD=0.68%(15~50 min)、RSD=0.58%、RSD=1.40%(平均回收率為101.95%)。
　　(

4、2)分別進(jìn)行了溶劑法和超聲波輔助法對(duì)肉桂單寧的提取工藝研究,通過單因素實(shí)驗(yàn)以及正交試驗(yàn)對(duì)單寧的提取條件進(jìn)行了優(yōu)化。溶劑法最佳工藝條件為:乙醇體積分?jǐn)?shù)60%,料液比為1:30 g·mL-1,提取時(shí)間為2.5 h,提取溫度為70℃,該條件下單寧得率為42.35 mg·g-1。超聲輔助法最佳工藝條件為:料液比為1:20 g·mL-1,提取溫度40℃,提取時(shí)間40 min,超聲功率360W,乙醇體積分?jǐn)?shù)50%,此條件下單寧得率為41.28 mg

5、·g-1。超聲輔助法提取肉桂單寧比溶劑法更加節(jié)能、省時(shí),有利于工業(yè)化規(guī)模生產(chǎn)。
　　(3)利用有機(jī)溶劑萃取法和大孔吸附樹脂法分離純化肉桂單寧粗提物。溶劑萃取法分離純化所得各樣品中單寧含量分別為:粗提物151.0 mg·g-1、初步除雜樣148.9 mg·g-1、乙酸乙酯萃取樣169.8 mg·g-1、剩余水層樣127.4 mg·g-1;考察了4種大孔吸附樹脂靜態(tài)吸附與解吸特性,其中AB-8型樹脂具有較好的吸附和解吸效果,其中,最佳

6、的靜態(tài)吸附時(shí)間為6h,解吸附時(shí)間為2 h,優(yōu)化后的純化工藝條件為:樣液初始濃度為1.2 mg·mL-1,樣液pH值為4.0,上樣流速為1.0 mL·min-1,解吸劑乙醇體積分?jǐn)?shù)為80%,洗脫流速為1.5 mL·min-1,純化后,肉桂單寧純度由15.1%提高到29.65%。
　　(4)對(duì)肉桂單寧粗提物、乙酸乙酯萃取物及肉桂單寧大孔樹脂純化物進(jìn)行了抗氧化活性的研究,結(jié)果指出,三種肉桂單寧樣品對(duì)·OH和DPPH·均具有較強(qiáng)的清除作用

7、,且清除率在一定的濃度范圍與濃度呈正相關(guān),隨著濃度增加而逐漸升高。達(dá)到一定濃度后,清除率基本保持不變。其中對(duì)DPPH·的清除能力較強(qiáng),三種樣品在濃度為0.04 mg·mL-1時(shí)清除率為90%左右,強(qiáng)于抗壞血酸清除能力,當(dāng)濃度小于等于0.03 mg·mL-1時(shí),三種樣品對(duì)DPPH·清除率為抗壞血酸2倍以上。此外,在試驗(yàn)濃度(0.1 mg·mL-1～0.6 mg·mL-1)范圍內(nèi),各樣品對(duì)·OH最大清除率均超過65%,略低于抗壞血酸清除率(