半枝蓮多糖的提取分離純化、表征鑒定及抗氧化活性研究.pdf

1、半枝蓮是唇形科黃芩屬多年生草本植物，在我國(guó)具有悠久的藥用歷史。為了加強(qiáng)對(duì)半枝蓮的綜合利用，本研究以中草藥半枝蓮(半枝蓮地上部分)為研究對(duì)象，對(duì)半枝蓮多糖的提取、純化、檢測(cè)及抗氧化活性進(jìn)行研究。通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)和正交試驗(yàn)考察了溫度、時(shí)間、料液比等因素對(duì)多糖提取率的影響。利用葡聚糖凝膠和離子交換層析分離技術(shù)對(duì)多糖進(jìn)行純化，經(jīng)快速層析純化系統(tǒng)(FPLC)和聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定純度，運(yùn)用質(zhì)譜考察了其單糖組成，采用體外化學(xué)模擬和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)對(duì)多糖的抗

2、氧化活性進(jìn)行了探討，試驗(yàn)結(jié)果如下： 1.優(yōu)化了半枝蓮粗多糖提取工藝參數(shù)，得到水提最佳浸提參數(shù)為：溫度 70℃，時(shí)間6h，料液比1：30，浸提1次，多糖得率為2.703％。 2.半枝蓮粗多糖經(jīng)DEAE-Cellulose-52 和Sepharose 4B純化，獲得了兩個(gè)組分SBP<,w>和 SBP<,s>，其紅外光譜均在 3420(O-H)、2940(C-H)、1665(C=O)、1445(c-o)、1120(c-o)cm

3、<,-1>等處有多糖的特征吸收峰，并且二者在877cm<,-1>處均有吸收峰，表明存在吡喃糖苷鍵。 3.苯酚-硫酸法測(cè)定了SBP<,w>和SBP<,s>的多糖含量分別為 89.60％和92.57％；間羥聯(lián)苯法測(cè)定糖醛酸含量分別為4.9％和19.6％。采用快速層析純化系統(tǒng)(FPLC)和聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)鑒定SBP<,s>為均一組分，并測(cè)定其相對(duì)分子質(zhì)量為1.1×10<,4>Da；利用 GC-MS 分析其單糖組成為：鼠李

4、糖、巖藻糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖，摩爾比依次為1.00：0.13：0.80：0.1.0：0.34：0.56：3.04。 4.通過(guò)化學(xué)模擬和對(duì)小鼠組織和體液的體外實(shí)驗(yàn)，研究了SBP<,w>和 SBP<,s>的體外抗氧化活性。采用鄰苯三酚法及 Fenton 體系測(cè)定 SBP<,w> 和 SBP<,s> 對(duì)O<,2>·和·OH的清除作用，SBP<,w>的半數(shù)清除濃度 IC<,5o-SBP<,w>> 分別為 921.7

5、3 μg/mL 和 89.26μg/mL；SBP<,s>的半數(shù)清除濃度IC<,5o-SBP<,w>>分別為800.00μg/mL和90.42μg/mL。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，SBP<,w>和SBP<,s>具有很強(qiáng)的清除O<,2>·和·OH生成的活性，對(duì)各種活性氧均具有抗氧化作用，具有直接清除自由基和脂質(zhì)過(guò)氧化的活性，可抑制小鼠肝組織的脂質(zhì)過(guò)氧化，對(duì)Fe<'2+>和 H<,2>O<,2> 誘導(dǎo)的肝組織過(guò)氧化物損傷具有保護(hù)作用，能減少紅細(xì)胞溶血的發(fā)

6、生。 5.半枝蓮多糖SBP<,w>和SBP<,s>按劑量小鼠腹腔注射，qd，連續(xù)35d，以分光光度法測(cè)定小鼠血清、肝組織中的超氧化物岐化酶(SOD)活力以及過(guò)氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)的含量。結(jié)果顯示SBP<,w>和SBP<,s>能劑量依賴性提高小鼠血清、肝組織中的SOD活力，并可劑量依賴性降低小鼠血清、肝組織中MDA的水平。SBP<,w>和SBP<,s>表現(xiàn)出較好的抗氧化作用，提示其在維系體內(nèi)自由基代謝平衡、延緩衰老方面具有一定