分離純化、結構及抗氧化活性研究.pdf

1、余甘(Phyllanthus emblica L.)是大戟科葉下珠屬植物，是世界衛(wèi)生組織指定在世界范圍內(nèi)推廣種植的3種保健植物之一，2002年被我國衛(wèi)生部確定為藥食兩用植物，是我國的傳統(tǒng)民族用藥。余甘多糖是余甘的主要活性成分，具有抗腫瘤和抗氧化生物活性。目前對余甘多糖的研究主要側重于精多糖藥理活性探索，對其活性級分及結構研究較少，且不夠深入。
　　 本文以余甘主栽品種“粉甘”果實為研究對象，對余甘多糖的提取技術、分離純化方法、結

2、構信息以及多糖抗氧化活性進行了系統(tǒng)研究，研究結果如下：
　　 從余甘中提取出粗多糖，其糖含量為31.13[％]；粗多糖經(jīng)凍融分級、脫色素、除蛋白、透析和凝膠柱層析等初步分級純化后，得白色絲狀余甘精制多糖EPS，多糖收率10.33[％]；EPS的化學組成為：中性糖61.67[％]，糖醛酸26.04[％]，蛋白質(zhì)1.98[％]，中性糖由Gal、Rha、Ara、Glc、Xyl和少量Man組成，糖醛酸為GalA。
　　 研究了余

3、甘多糖的超聲波強化提取和微波輔助萃取工藝。超聲波提取最佳工藝參數(shù)：超聲波提取溫度80 ℃、超聲波時間70 min、超聲波功率475 W、料液比1:20；微波前處理-熱水浸提法最佳工藝參數(shù)：微波前處理功率480W，微波處理時間60s，熱水浸提溫度90℃，浸提時間4h。
　　 對水提余甘精多糖的分級純化方法和化學組成進行了研究。EPS經(jīng)DEAE-Sepharose CL-6B柱層析分級后得到2個多糖級分EPS1和EPS2；EPS1為

4、中性多糖，經(jīng)HPGFC分級后得到2個多糖級分EPS1-1和EPS1-2；EPS2為分子量均一的酸性多糖，；EPS1-1、EPS1-2和EPS2分別占總洗脫量的3.39[％]、19.60[％]和77.01[％]，總回收率92.32[％]。
　　 EPS1-1是一種中性多糖，相對分子質(zhì)量約為123 Kda，純度98.53[％]，總糖95.09[％]，主要由Gal、Glc組成；EPS1-2總糖含量96.66[％]，純度98.91[％]

5、，分子量約為15 Kda，是一種中性多糖，主要由Gal、Glc和Xyl組成；IR光譜顯示EPS1-1和EPS1-2是β構型的吡喃醛糖。
　　 EPS2是一種酸性多糖，含有79.01[％]的半乳糖醛酸，總糖含量97.53[％]，相對分子質(zhì)量約為140 Kda，純度98.96[％]，主要由GalA、Gal和Rha組成，還有少量的Ara；單糖組成結合IR圖譜確定EPS2是一種果膠多糖，多糖分子以α-糖苷鍵為主，并含有一定量的β-糖苷鍵

6、。
　　 應用NMR、GC-MS、FT-IR、GC、HPLC 等儀器分析技術，配合部分酸水解、甲基化分析等經(jīng)典化學方法研究了余甘多糖EPS1-2和EPS2的化學結構。
　　 EPS1-2的結構特征為：糖殘基構型主要是1，4-，1，6-β-D-Galp、T-，1，4-，1，3，6-β-D-Glcp以及1，3，6-，1，2-β-D-Manp；主鏈由Galp和Glcp連接形成半乳葡聚糖，(1→)-β-D-Glcp為主鏈的非還原

7、性末端殘基，主鏈每五個糖殘基中有一個分支；由1，6-β-D-Glcp通過O-3位與1，3，6-，1，2-β-D-Manp等中性糖側鏈相連；Manp殘基處于支鏈位置，1，3，6-Manp處于支鏈的核心區(qū)域。EPS1-2主要由β-構型構成，含有少量α-構型。部分糖殘基被乙酰基取代。EPS1-2重復結構單位可能為：
　　 EPS2一種典型的果膠多糖，主鏈由1，4-D-GalpA線性連接形成半乳糖醛酸聚糖，由1，4-D-GalpA通過O

8、-4位與1，2-、1，2，4-L-Rhap的O-1位交替連接形成含有較多分支的鼠李糖半乳糖醛酸聚糖。半乳糖醛酸聚糖鏈部分羧基被甲酯化，部分O-2或O-3位被乙?；〈?。T-、1，6-、1，3，6-α-Galp和T-、1，5-α-Araf聚合形成的阿拉伯半乳聚糖以及半乳聚糖是EPS2側鏈的主要組成，通過Rhap殘基的O-4位與主鏈相連。T-α-GalpA、T-α-L-Araf和T-β-Galp位于非還原性末端。
　　 通過檢測EP

9、S、EPS1、EPS1-2和EPS2對羥基自由基、DPPH自由基、超氧陰離子自由基的清除能力以及抗脂質(zhì)過氧化和還原能力，對余甘多糖的體外抗氧化活性進行了研究，并與陽性對照BHT進行比較。結果表明，EPS1-2和EPS2均表現(xiàn)出很強的抗氧化活性，各級分多糖的抗氧化活性大小為EPS2＞EPS1-2＞EPS1＞EPS，均多糖的活性大于雜多糖；EPS2的還原能力強于BHT。
　　 酸性多聚糖EPS2的抗氧化活性高于中性多聚糖EPS1-2