佛手多糖的分離純化及抗氧化活性研究.pdf

1、植物多糖具有抗腫瘤、抗氧化、抗炎、抗病毒等作用,且無毒副作用、資源廣泛，其多方面的生物活性已經(jīng)得到開發(fā)和應用。其中，植物多糖因具有良好的抗氧化效果而廣泛用于美容食品、化妝品及保健品中。佛手（CitriSarcodactylisFructus）為蕓香科柑橘屬植物佛手CitrusmedicoL.Var.sarcodactylisSwingle的干燥果實。其化學成分包括黃酮類、揮發(fā)油類、香豆素類、和多糖等，具有抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、抗炎、抗氧化等

2、作用而具有較高的研究價值。目前，國內(nèi)外對佛手的研究大多主要集中在揮發(fā)油類和黃酮類上，對佛手多糖的研究主要是針對粗多糖及分子水平上的抗氧化分析和初步的結(jié)構研究，樣本量少且缺乏能夠有效模擬體內(nèi)環(huán)境的細胞水平的抗氧化分析及構效關系研究。據(jù)此，本文在充分總結(jié)前人關于佛手多糖研究的基礎上，分離純化得到一系列佛手多糖，測定佛手多糖的結(jié)構及在細胞水平上進行抗氧化活性測定和分析，并對抗氧化活性與結(jié)構之間的關系進行探索，希望能為佛手多糖的進一步研究及開發(fā)

3、利用提供有價值的參考。本文的主要研究及結(jié)果如下：
　?、俜鹗执侄嗵堑闹苽浼翱寡趸钚詼y試采用傳統(tǒng)的熱水提取和乙醇逐級沉出法對佛手粗多糖進行初步分離，對多糖的理化性質(zhì)進行分析并利用苯酚-硫酸法測定其多糖含量，間羥基聯(lián)苯比色法測定糖醛酸含量，最后通過優(yōu)化細胞水平抗氧化（cellularantioxidantactivity,CAA)實驗參數(shù)在細胞水平上對多糖的抗氧化能力進行分析。結(jié)果表明水提醇沉法獲得三種粗多糖BP1、BP2和BP3，

4、理化性質(zhì)分析顯示三種粗多糖都有糖醛酸，不含有蛋白質(zhì)、核酸等雜質(zhì)；三種粗多糖的糖含量分別為17.3％、19.9%和16.6%，糖醛酸含量分別為18.5%、21.1%和22.8%；細胞水平抗氧化測試顯示三種粗多糖對HepG2細胞中DCFH轉(zhuǎn)化為DCF時產(chǎn)生的熒光值均有一定的抑制作用，表明三種多糖均有一定的抗氧化效果，通過三者的EC50值及CAA值比較得知BP3的抗氧化作用最為明顯。
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5、52纖維素柱層析法結(jié)合SephadexG-100凝膠柱層析法純化佛手粗多糖BP3，收集純化后的多糖，利用CAA法對純化后多糖的抗氧化能力進行分析和比較。結(jié)果表明兩次柱分離之后獲得4種多糖（BP3-1、BP3-2、BP3-3和BP3-4），SephadexG-100柱層析法對四種多糖的純度進行分析，純化后呈現(xiàn)為單一峰，表明四種多糖均是均一性多糖。CAA法分析四種進行抗氧化活性，結(jié)果顯示四種均一性多糖對HepG2細胞中產(chǎn)生的熒光信號抑制作用

6、明顯，經(jīng)分析和比較四種多糖的EC50和CAA，結(jié)果表明其抗氧化能力為BP3-2>BP3-1>BP3-3>BP3-4。
　　③佛手均一性多糖抗氧化活性與其結(jié)構之間關系探索對四種均一性多糖的糖含量及糖醛酸含量進行計算，利用紫外光譜和紅外光譜對四種佛手多糖進行光譜分析，高效液相色譜法分析四種多糖的單糖組成，進而對四種均一性的抗氧化結(jié)果和其糖醛酸含量、鏈構型及單糖組成之間的關系進行探索研究。四種均一性多糖的糖含量分別為63.1%、18.0

7、%、21.1%和36.2%；糖醛酸含量分別為16.4%、22.8%、20.4%和33.2%；紫外光譜分析結(jié)果表明四種多糖不含有蛋白質(zhì)和核酸；紅外光譜分析顯示四種多糖中BP3-1的鏈結(jié)構為α-型，其余三種均為β-構型；HPLC測定單糖組成結(jié)果表明四種多糖主要由鼠李糖和葡萄糖按不同比例組成，其中BP3-1的摩爾比為鼠李糖：葡萄糖=12.45:1.00,BP3-2的摩爾比為鼠李糖：葡萄糖=18.42:1.00,BP3-3的摩爾比為鼠李糖：葡萄