嵌段聚合物對(duì)蛋白結(jié)晶調(diào)控的作用研究.pdf

1、眾所周知，蛋白質(zhì)是生物活性物質(zhì)中非常重要的一類(lèi)，而且是大多數(shù)藥物的作用靶標(biāo)，因此對(duì)蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)的確定就顯得尤為重要。對(duì)于蛋白質(zhì)等生物大分子具體結(jié)構(gòu)的解析，通過(guò)培養(yǎng)蛋白質(zhì)晶體進(jìn)行X射線衍射分析是最可靠的方法。蛋白質(zhì)分子的結(jié)晶是一個(gè)多參數(shù)控制的復(fù)雜過(guò)程，包括物理，化學(xué)，生物化學(xué)等因素，具體的分為：溫度、時(shí)間、電解質(zhì)性質(zhì)、粘度、離子強(qiáng)度、過(guò)飽和度、蛋白質(zhì)純度、蛋白質(zhì)本身的對(duì)稱(chēng)性以及蛋白質(zhì)穩(wěn)定性和蛋白質(zhì)等電點(diǎn)等因素的影響。為了獲得合適的蛋白晶

2、體就必須對(duì)這些因素加以綜合考慮，選擇合適的沉淀劑來(lái)提高蛋白的結(jié)晶效率。
　　 雞蛋清中的溶菌酶是當(dāng)前研究最清楚的蛋白質(zhì)之一，該酶分子量為14000，等電點(diǎn)10.5～11.2，pH值在1.2～11.3范圍內(nèi)劇烈變化時(shí)，結(jié)構(gòu)仍穩(wěn)定不變。雞蛋清溶菌酶蛋白很容易形成單晶，被視為結(jié)晶模型蛋白。因此選擇這種模型蛋白作為我們的研究對(duì)象，有利于我們的實(shí)驗(yàn)研究。
　　 近年來(lái)，嵌段共聚物通過(guò)自身在溶液中的自組裝來(lái)調(diào)控碳酸鈣等小分子物質(zhì)在溶

3、液中結(jié)晶，進(jìn)而獲得可控的且具有特異性的復(fù)合材料受到了廣泛的關(guān)注。這些形態(tài)形成機(jī)制主要集中在高聚物的選擇性吸附、微觀尺度轉(zhuǎn)化以及高度自組裝等方面。通過(guò)自身合成嵌段聚合物來(lái)探討它們?cè)谌芤褐械淖越M裝行為，以及對(duì)溶菌酶蛋白質(zhì)的結(jié)晶是否也有類(lèi)似的影響，進(jìn)而為蛋白結(jié)晶沉淀劑的選擇提供了優(yōu)勢(shì)，為調(diào)控蛋白質(zhì)晶體結(jié)構(gòu)與蛋白質(zhì)工程開(kāi)辟一條新的途徑。主要應(yīng)用小角X射線散射（Small Angle X-ray Scattering），光散射（Dynamic L

4、ightScattering& Static Light Scattering）以及透射電鏡（Transmission ElectronMicrograph）來(lái)研究嵌段共聚物在溶液中的自組裝。通過(guò)我們的實(shí)驗(yàn)證明，當(dāng)這些高聚物溶液中加入大量電解質(zhì)小分子時(shí)，自組裝遭到一定程度的破壞，最后形成的溶菌酶蛋白晶體形貌沒(méi)有明顯的差別。相反，從溶液中去掉這些小分子化合物，能夠形成不同形貌的溶菌酶晶體。
　　 因此本碩士論文以溶菌酶為模型蛋白，