T、B淋巴細(xì)胞對急性胰腺炎的作用及其免疫治療.pdf

1、隨著重癥醫(yī)學(xué)的發(fā)展,近十年來重癥急性胰腺炎(sever acute pancreatitis,SAP)患者在早期呼吸、循環(huán)和腎功衰竭支持治療效果顯著提高,但是死亡率并沒有明顯下降[1-3]。大多數(shù)人認(rèn)為,重癥急性胰腺炎免疫炎性細(xì)胞產(chǎn)生的眾多炎性因子使遠(yuǎn)處器官損傷,出現(xiàn)循環(huán)、呼吸、泌尿和神經(jīng)系統(tǒng)的嚴(yán)重?fù)p害。然而大多數(shù)急性胰腺炎患者可以阻止過度炎癥反應(yīng)的發(fā)生發(fā)展,使其表現(xiàn)為輕癥胰腺炎具有自愈傾向[4,5]。但是為什么有20％的患者會發(fā)展為重

2、癥急性胰腺炎?雖然有多種假說試圖解釋這一現(xiàn)象,但其機制一直未明。目前越來越多的學(xué)者認(rèn)為抗炎-抑炎平衡紊亂致使機體不足以拮抗過度的炎癥反應(yīng)是SAP發(fā)生的核心問題。
　　淋巴細(xì)胞是重要的機體免疫應(yīng)答細(xì)胞,分別介導(dǎo)體液免疫和細(xì)胞免疫。對維持機體抗炎-抑炎平衡狀態(tài)起著重要的作用。然而淋巴細(xì)胞在急性胰腺炎的作用仍不十分清楚。因此進一步研究淋巴細(xì)胞在急性胰腺炎中的免疫調(diào)節(jié)功能可以更好地理解SAP發(fā)生發(fā)展。
　　重癥急性胰腺炎的治療手段多

3、是對癥治療,目前沒有良好的治療方法抑制過強的免疫反應(yīng),恢復(fù)免疫平衡,其療效不盡如人意[2,6]。反應(yīng)近年來間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells, MSCs)在免疫調(diào)節(jié)領(lǐng)域所取得的巨大進展,研究發(fā)現(xiàn)可以抑制過強的免疫[7],為重癥急性胰腺炎的免疫治療提供了新的視角[8]。是否間充質(zhì)干細(xì)胞可以作為免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞,調(diào)節(jié)免疫平衡,抑制炎癥級聯(lián)反應(yīng),為重癥急性胰腺炎治療提供新的免疫治療策略。
　　實驗?zāi)康模?br>　　1

4、.研究T、B淋巴細(xì)胞對急性胰腺炎的作用;2.檢測B細(xì)胞的亞群調(diào)節(jié)性B細(xì)胞(regulatory B cells,Bregs)在急性胰腺炎的功能;3.探討臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UCMSCs)通過免疫調(diào)節(jié)作用對重癥急性胰腺炎大鼠模型的治療效果及其機制。
　　材料方法：
　　1.通過雨蛙素腹腔誘導(dǎo)不同淋巴細(xì)胞缺陷小鼠及其同系野生型急性胰腺炎小鼠模型;2.檢測血

5、清淀粉酶、干濕重和胰腺、肺組織病理變化評價胰腺炎損傷程度;3.利用酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)技術(shù)檢測血清中TNF-α和 IFN-γ炎癥因子表達水平;4.使用流式細(xì)胞技術(shù)比較輕重胰腺炎患者中Bregs的含量;5.分析急性胰腺炎小鼠模型和正常小鼠 Bregs的含量和炎癥水平變化關(guān)系;6.使用逆行胰膽管注射?；悄懰徕c造重癥急性胰腺炎大鼠模型;分別在誘導(dǎo)模型后0h,1h,6

6、h,12h四個時間點經(jīng)尾靜脈注射UCMSCs的細(xì)胞懸液,以及造模1小時后給予20ml/kg,10ml/kg,1ml/kg,0.1ml/kg不同劑量的UCMSCs;7.通過檢測死亡率,血清淀粉酶,腹水量,胰腺干濕重,及胰腺、肺組織病理變化觀察評價UCMSCs注射時間和劑量與治療效果之間關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　1.T、B細(xì)胞在小鼠急性胰腺炎的作用
　　T細(xì)胞缺陷組和T、B細(xì)胞聯(lián)合缺陷組與同系對照組相比血清淀粉酶、胰腺水腫、

7、病理評分顯著降低,血清炎癥因子TNF-α和IFN-γ顯著減少(P<0.05)。B淋巴缺陷組與同系對照組相比血清淀粉酶、胰腺水腫、病理評分顯著增高,血清炎癥因子TNF-α和 IFN-γ反而增加(P<0.05)。T細(xì)胞缺陷組和 T、B細(xì)胞聯(lián)合缺陷組腺外器官肺組織損傷明顯減輕,B細(xì)胞缺陷組與同系對照組肺組織損傷無明顯差異(P>0.05)
　　2.Bregs在重癥急性胰腺炎的變化
　　重癥急性胰腺炎患者Bregs含量顯著低于輕癥胰腺

8、炎患者(P<0.05);胰腺炎小鼠模型 Bregs的含量也顯著低于正常小鼠模型并且 Bregs的變化與血清促炎癥因子負(fù)相關(guān)。
　　3.臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞治療重癥急性胰腺炎的治療作用
　　0h UCMSCs治療組與SAP組相比:死亡率從58%降至10%,腹水量明顯減少,血淀粉酶,炎癥因子和干濕重也顯著性降低。胰和肺組織病理損傷顯著減輕(P<0.05);2、在誘導(dǎo)大鼠胰腺炎后不同時間點0h、1h、6h給予臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞治療均有明

9、顯的治療作用,但效果逐漸減弱;3、20ml/kg,10ml/kg,1ml/kg給予臍帶間充質(zhì)干治療,均有明顯的治療作用,但效果逐漸減弱(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　本研究證實了淋巴細(xì)胞是重要的參與急性胰腺炎促炎抗炎平衡紊亂,T細(xì)胞的主要作用是促進炎癥反應(yīng)。B淋巴細(xì)胞在急性胰腺炎炎癥反應(yīng)中有抑制作用,其機制可能是B淋巴細(xì)胞的亞型Bregs抑制過強的炎癥反應(yīng)。使用臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞免疫治療可明顯降低SAP的損傷程度并且治療效