CMKLR1基因缺失對雙氫睪酮誘導(dǎo)雄性小鼠骨形成的影響.pdf

1、骨質(zhì)疏松癥（Osteoporosis）是一種常見的骨代謝性疾病，隨著社會的老齡化，該病的患病率正日益上升，嚴(yán)重影響著人類的健康。由于老年男性骨質(zhì)疏松發(fā)病率的提高，雄激素對骨的作用機(jī)制成為人們關(guān)注的熱點(diǎn)。成骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞、骨細(xì)胞、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞表面均有雄激素受體，雄激素對成骨細(xì)胞的調(diào)控是直接通過成骨細(xì)胞上的雄激素受體實(shí)現(xiàn)的。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells，BMSCs)是可以向不同

2、類型的細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化的，其轉(zhuǎn)化命運(yùn)由細(xì)胞外信號分子調(diào)控。其中，細(xì)胞因子Chemerin其受體之一CMKLR1能夠介導(dǎo)免疫、炎癥、代謝、生殖及癌癥方面的疾病。Chemerin與其受體CMKLR1協(xié)調(diào)作用可以促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向脂肪細(xì)胞轉(zhuǎn)化，而CMKLR1介導(dǎo)的信號通路在骨形成中的作用至今沒有報(bào)道，本文主要闡釋了雙氫睪酮與CMKLR1信號通路對骨形成的影響。
　　為了闡明DHT/CMKLR1信號通路對小鼠體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化能力的影

3、響以及對小鼠骨組織代謝的影響，本課題主要從體內(nèi)試驗(yàn)和體外試驗(yàn)進(jìn)行了探究。對于體內(nèi)試驗(yàn)，我們對出生25天的C57雌鼠進(jìn)行了分組，分為對照組、DHT組和DHT＋α-NETA組，每組5只，處理21天后取股骨和脛骨進(jìn)行骨組織micro-CT掃描分析，檢測骨礦物質(zhì)密度、骨小梁數(shù)和骨體積分?jǐn)?shù)；用熒光定量的方法檢測骨形成相關(guān)因子ALP、Runx2和Col1a2的表達(dá)，探究CMKLR1被拮抗后DHT對骨代謝的調(diào)控。對于體外試驗(yàn)主要是分離培養(yǎng)CMKLR1

4、基因敲除鼠和野生型雄鼠的BMSCs，在DHT的誘導(dǎo)下觀察BMSCs的成骨分化能力。并通過在野生型小鼠的BMSCs中添加CMKLR1的拮抗劑α-NETA及通過瞬時轉(zhuǎn)染CMKLR1 siRNA來沉默CMKLR1，降低CMKLR1與Chemerin的結(jié)合，觀察BMSCs的分化，通過堿性磷酸酶染色的方法檢測ALP的活性，通過茜素紅染色的方法檢測鈣結(jié)節(jié)的形成情況，通過熒光定量的方法檢測成骨相關(guān)基因ALP、Runx2和Osterix表達(dá)的變化，用W

5、estern blot的方法檢測Runx蛋白的變化。結(jié)果表明，在體內(nèi)試驗(yàn)中DHT增加了骨密度、骨小梁數(shù)和骨體積分?jǐn)?shù)，骨形成相關(guān)因子ALP、Runx2和Col1a2的表達(dá)也都上調(diào)；注射α-NETA后，各項(xiàng)指標(biāo)都有所下降。體外培養(yǎng)誘導(dǎo)BMSCs的試驗(yàn)也顯示，CMKLR1缺失后堿性磷酸酶的活性降低，鈣結(jié)節(jié)形成減少，成骨相關(guān)基因的表達(dá)和Runx2蛋白都下調(diào)。因此，DHT可以促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化，并促進(jìn)成骨細(xì)胞的礦化，CMKLR1基