鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶在雌激素抑制雙氫睪酮誘導(dǎo)心肌肥大中的作用.pdf

1、[目的]
　　 體外培養(yǎng)新生大鼠心肌細(xì)胞，在細(xì)胞和分子水平觀察17β雌二醇(17β-estradiol，E2)對(duì)雙氫睪酮(DHT)誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大反應(yīng)的影響及可能機(jī)制，觀察E2是否通過降低鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(calcineurin，CaN)的表達(dá)而抑制心肌細(xì)胞肥大。從而為心肌肥大的預(yù)防和治療提供新的思路和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 [方法]
　　 1.胰蛋白酶分次消化法分離乳鼠心肌細(xì)胞，差速貼壁法純化心肌細(xì)胞，αsarcon

2、me-actin抗體免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定心肌細(xì)胞。心肌細(xì)胞在無血清無酚紅培養(yǎng)基中培養(yǎng)48h后，用DHT誘導(dǎo)心肌細(xì)胞肥大，建立心肌細(xì)胞肥大模型。24h后檢測心肌細(xì)胞肥大的指標(biāo)：心肌細(xì)胞表面積；BCA法測定心肌細(xì)胞蛋白含量：逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(Reverse transcription PCR，RT-PCR)兩步法檢測心肌細(xì)胞肥大的特征性基因-心房利鈉因子(atrial natriureticfactor，ANF)，β-肌球蛋白重鏈(β-m

3、yosin heavy chain，β-MHC)mRNA的表達(dá)。
　　 2.觀察E2或鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶的抑制劑環(huán)孢霉素A(Cyclosporin A，CsA)對(duì)DHT誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大反應(yīng)的影響。檢測指標(biāo)：細(xì)胞表面積，心肌細(xì)胞蛋白含量，心房利鈉因子(ANF)，β-肌球蛋白重鏈(β-MHC)mRNA表達(dá)。
　　 3.檢測鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶通路在雌激素抑制雙氫睪酮誘導(dǎo)心肌細(xì)胞肥大反應(yīng)中的變化及機(jī)制。檢測指標(biāo)：免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測心肌

4、細(xì)胞CaN的表達(dá)，RT-PCR檢測心肌細(xì)胞中CaNmRNA表達(dá)。
　　 [結(jié)果]
　　 1.免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示培養(yǎng)的心肌細(xì)胞純度達(dá)到90％以上，心肌細(xì)胞分離良好。與對(duì)照組相比，10-8 mol/L的DHT能顯著的增加心肌細(xì)胞表面積、蛋白質(zhì)含量、ANP和β-MHC基因表達(dá)的增加(P<0.01)，心肌細(xì)胞肥大模型建立成功。
　　 2.E2或CsA可抑制DHT誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大；單獨(dú)給予E2或CsA對(duì)正常心肌細(xì)胞沒有

5、影響，CsA不能增強(qiáng)E2對(duì)DHT誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大的抑制作用。
　　 3.免疫細(xì)胞化學(xué)及RT-PCR的結(jié)果發(fā)現(xiàn)心肌細(xì)胞經(jīng)過DHT誘導(dǎo)后肥大心肌細(xì)胞內(nèi)CaN表達(dá)較對(duì)照組增加，10-8mol/L E2能部分抑制DHT誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞內(nèi)CaN的表達(dá)的增加；單獨(dú)給予E2對(duì)正常心肌細(xì)胞內(nèi)CaN表達(dá)無明顯影響。
　　 [結(jié)論]
　　 1.DHT可誘導(dǎo)心肌細(xì)胞肥大。
　　 2.E2或CsA可抑制DHT誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大。