鈣調神經磷酸酶在雌激素抑制雙氫睪酮誘導心肌肥大中的作用.pdf

1、[目的]
　　 體外培養(yǎng)新生大鼠心肌細胞，在細胞和分子水平觀察17β雌二醇(17β-estradiol，E2)對雙氫睪酮(DHT)誘導的心肌細胞肥大反應的影響及可能機制，觀察E2是否通過降低鈣調神經磷酸酶(calcineurin，CaN)的表達而抑制心肌細胞肥大。從而為心肌肥大的預防和治療提供新的思路和實驗依據。
　　 [方法]
　　 1.胰蛋白酶分次消化法分離乳鼠心肌細胞，差速貼壁法純化心肌細胞，αsarcon

2、me-actin抗體免疫細胞化學染色鑒定心肌細胞。心肌細胞在無血清無酚紅培養(yǎng)基中培養(yǎng)48h后，用DHT誘導心肌細胞肥大，建立心肌細胞肥大模型。24h后檢測心肌細胞肥大的指標：心肌細胞表面積；BCA法測定心肌細胞蛋白含量：逆轉錄聚合酶鏈反應(Reverse transcription PCR，RT-PCR)兩步法檢測心肌細胞肥大的特征性基因-心房利鈉因子(atrial natriureticfactor，ANF)，β-肌球蛋白重鏈(β-m

3、yosin heavy chain，β-MHC)mRNA的表達。
　　 2.觀察E2或鈣調神經磷酸酶的抑制劑環(huán)孢霉素A(Cyclosporin A，CsA)對DHT誘導的心肌細胞肥大反應的影響。檢測指標：細胞表面積，心肌細胞蛋白含量，心房利鈉因子(ANF)，β-肌球蛋白重鏈(β-MHC)mRNA表達。
　　 3.檢測鈣調神經磷酸酶通路在雌激素抑制雙氫睪酮誘導心肌細胞肥大反應中的變化及機制。檢測指標：免疫細胞化學法檢測心肌

4、細胞CaN的表達，RT-PCR檢測心肌細胞中CaNmRNA表達。
　　 [結果]
　　 1.免疫細胞化學染色顯示培養(yǎng)的心肌細胞純度達到90％以上，心肌細胞分離良好。與對照組相比，10-8 mol/L的DHT能顯著的增加心肌細胞表面積、蛋白質含量、ANP和β-MHC基因表達的增加(P<0.01)，心肌細胞肥大模型建立成功。
　　 2.E2或CsA可抑制DHT誘導的心肌細胞肥大；單獨給予E2或CsA對正常心肌細胞沒有

5、影響，CsA不能增強E2對DHT誘導的心肌細胞肥大的抑制作用。
　　 3.免疫細胞化學及RT-PCR的結果發(fā)現心肌細胞經過DHT誘導后肥大心肌細胞內CaN表達較對照組增加，10-8mol/L E2能部分抑制DHT誘導的心肌細胞內CaN的表達的增加；單獨給予E2對正常心肌細胞內CaN表達無明顯影響。
　　 [結論]
　　 1.DHT可誘導心肌細胞肥大。
　　 2.E2或CsA可抑制DHT誘導的心肌細胞肥大。