miR-223在日本血吸蟲感染免疫調(diào)節(jié)中的作用分析.pdf

1、日本血吸蟲?。╯chistosomiasis）流行廣泛、危害嚴(yán)重，是我國重大的公共衛(wèi)生問題之一。日本血吸蟲可感染40多種哺乳動物宿主，不同宿主對血吸蟲感染的適宜性存在較大的差別。不同宿主有著獨特的機體內(nèi)環(huán)境，會影響日本血吸蟲的生長發(fā)育、雌雄合抱和蟲卵形成，最終影響蟲體在宿主體內(nèi)的存活狀態(tài)及宿主的病理變化。
　　microRNAs為近年來發(fā)現(xiàn)的一類小分子非編碼RNA，它在包括免疫應(yīng)答在內(nèi)的許多生物學(xué)過程中均發(fā)揮重要的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控功能。

2、microRNA223(miR-223)是一種在髓系細(xì)胞中特異高表達(dá)的miRNA，前期研究表明，不同適宜性宿主感染日本血吸蟲后，miR-223表達(dá)水平呈現(xiàn)較大差別，可能在宿主抗血吸蟲感染天然免疫中發(fā)揮重要的作用，但對其調(diào)節(jié)機制等仍了解甚少。本文比較分析了不同易感性宿主感染日本血吸蟲后miR-223的表達(dá)差別，再深入分析了血吸蟲童蟲抗原SSA和蟲卵抗原SEA等抗原刺激小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7后miR-223的表達(dá)差別，及巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)染m

3、iR-223模擬物后，對SSA和SEA抗原刺激的調(diào)節(jié)作用。
　　研究結(jié)果為加深理解宿主miR-223在抗血吸蟲感染天然免疫中的調(diào)節(jié)作用提供了理論基礎(chǔ)。
　　1.不同易感宿主在血吸蟲感染早期miR-223的表達(dá)水平分析
　　分別用日本血吸蟲尾蚴感染易感宿主BALB/c小鼠、非易感宿主Wistar大鼠和抗性宿主東方田鼠，在感染后3d、7d和10d收集血清，應(yīng)用熒光實時定量PCR法測定了不同宿主在血吸蟲感染前和感染后不同時期

4、里miR-223的表達(dá)情況。結(jié)果顯示不同易感性宿主感染血吸蟲后miR-223表達(dá)呈現(xiàn)明顯的差別，小鼠感染血吸蟲后miR-223的表達(dá)水平呈上升趨勢，大鼠先上升后略有下降，而東方田鼠則呈下降趨勢。另從miR-223的總體表達(dá)水平看，感染日本血吸蟲的小鼠一直高于大鼠，而大鼠一直高于東方田鼠。研究結(jié)果提示miR-223可能在不同適宜性宿主抗血吸蟲感染中發(fā)揮獨特的調(diào)節(jié)作用，并影響著日本血吸蟲在不同適宜性宿主體內(nèi)的生長發(fā)育及存活。
　　2.

5、不同抗原刺激巨噬細(xì)胞后miR-223的表達(dá)水平分析
　　分別以血吸蟲童蟲抗原SSA、蟲卵抗原SEA和三種TLR配體刺激小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7，分析不同抗原刺激后miR-223的表達(dá)變化。結(jié)果表明POLY（I:C）（TLR3受體配體）和LPS（TLR4受體配體）刺激巨噬細(xì)胞后都下調(diào)了miR-223的表達(dá)，而PAM3CSK4（TLR2受體配體）刺激后上調(diào)了miR-223的表達(dá)。血吸蟲童蟲抗原SSA和蟲卵抗原SEA刺激小鼠巨噬細(xì)胞

6、RAW264.7后，前者下調(diào)了miR-223的表達(dá)，而后者則起上調(diào)作用，提示SSA和SEA刺激巨噬細(xì)胞時，miR-223可能通過不同的TLR信號通路發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。
　　3. miR-223對血吸蟲抗原刺激巨噬細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用分析
　　為明確miR-223對SSA和SEA刺激巨噬細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用，先用miR-223模擬物轉(zhuǎn)染RAW264.7巨噬細(xì)胞，再分別用SSA或SEA刺激，進(jìn)而分析巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)染/刺激后部分TLR受體及其相關(guān)通路

7、分子、炎性分子、巨噬細(xì)胞表面分子和iNOS等的表達(dá)變化。
　　結(jié)果顯示，單用SEA刺激巨噬細(xì)胞時，TLR1、2、3、4的表達(dá)都呈現(xiàn)不同水平的上調(diào)，其中TLR2和TLR1表達(dá)水平差異顯著（P＜0.05），TLR通路分子MyD88表達(dá)下調(diào)，而TRIF表達(dá)上調(diào)，IL-1β、IL-10、IL-6和TNF四種炎性因子都呈不同水平上調(diào)。而單用SSA抗原刺激時，TLR4和TLR1的表達(dá)上調(diào)顯著（P＜0.05）， TLR2表達(dá)則顯著下調(diào)，MyD8

8、8表達(dá)上調(diào)，TRIF表達(dá)水平下調(diào)，IL-1β和IL-10表達(dá)水平上調(diào)，TNF表達(dá)略有下調(diào)，IL-6表達(dá)水平變化不明顯。提示SEA和SSA識別和激活的巨噬細(xì)胞TLR分子和通路分子，及誘導(dǎo)產(chǎn)生的免疫效應(yīng)分子可能有差別，在刺激和誘導(dǎo)宿主抗血吸蟲感染和血吸蟲致病過程中可能也發(fā)揮不同的作用。
　　當(dāng)先用miR-223模擬物轉(zhuǎn)染細(xì)胞，再用SEA刺激細(xì)胞時，除TLR2與未刺激細(xì)胞表達(dá)水平相當(dāng)外，TLR1、3、4表達(dá)水平都低于未刺激細(xì)胞，其中TL

9、R4下調(diào)最明顯。通路分子中MyD88表達(dá)水平上調(diào)，TRIF表達(dá)水平下調(diào)。炎性因子中IL-6、IL-1β、IL-10呈上調(diào)表達(dá)，而TNF表達(dá)下調(diào)。但相對單用SEA刺激，巨噬細(xì)胞各種炎性因子的表達(dá)都呈不同程度下調(diào)，其中IL-6下調(diào)最明顯，其次是IL-1β。提示miR-223對SEA刺激巨噬細(xì)胞TLR1、2、3、4可能有負(fù)調(diào)控作用，對MyD88可能有正調(diào)控作用，而對TRIF則起負(fù)調(diào)控作用，同時誘導(dǎo)了IL-6、IL-1β、IL-10和TNF呈下

10、調(diào)表達(dá)。
　　而miR-223模擬物先轉(zhuǎn)染巨噬細(xì)胞，再用SSA刺激細(xì)胞時，除了TLR4顯著上調(diào)（P＜0.05），其余3種TLR的表達(dá)水平都下調(diào)。其中相對于單獨用SSA抗原刺激的細(xì)胞，TLR3表達(dá)水平相當(dāng)，TLR1、4表達(dá)水平下調(diào)，TLR2表達(dá)水平上調(diào)。信號通路分子MyD88和TRIF表達(dá)都下調(diào)，其中MyD88的表達(dá)水平比單獨用SSA抗原刺激的低，而TRIF則比單獨用SSA抗原刺激的高。炎癥分子IL-1β和IL-10上調(diào)表達(dá)，TNF

11、和IL-6則下調(diào)表達(dá)。但相對單用SEA刺激，TNF的表達(dá)水平略有上調(diào)，其余三種都呈下調(diào)表達(dá)，其中IL-1β下調(diào)最明顯。提示miR-223對SSA抗原刺激的巨噬細(xì)胞TLR1、4表達(dá)可能有負(fù)調(diào)控作用，對TLR2表達(dá)有正調(diào)控作用，對MyD88可能有負(fù)調(diào)控作用，對TRIF則起正調(diào)控作用。同時誘導(dǎo)IL-1β、IL-10和IL-6表達(dá)下調(diào)。
　　本研究比較分析了不同易感性宿主感染日本血吸蟲后miR-223的表達(dá)差別，同時探討了miR-223對