磁分離酶聯(lián)免疫分析方法在日本血吸蟲病診斷中的應(yīng)用.pdf

1、日本血吸蟲病是一種人獸共患的寄生蟲病，在我國(guó)主要分布于長(zhǎng)江中下游地區(qū)。診斷工作是控制血吸蟲病的關(guān)鍵步驟，常用的診斷方法包括病原學(xué)方法和免疫學(xué)方法，但病原學(xué)方法操作繁瑣，而現(xiàn)有免疫學(xué)方法存在假陰性率高，靈敏度低等不足。
　　 磁分離酶聯(lián)免疫分析（MEIA）法是一種將磁分離和酶聯(lián)免疫分析技術(shù)相結(jié)合，實(shí)現(xiàn)對(duì)抗原或抗體進(jìn)行測(cè)定的方法。MEIA法由于具有簡(jiǎn)便快速、靈敏特異、樣品用量少、易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化的特點(diǎn)，在免疫分析領(lǐng)域的應(yīng)用越來越廣泛。本

2、研究在對(duì)關(guān)鍵原料偶聯(lián)技術(shù)研究的基礎(chǔ)上，對(duì)磁酶免分析條件進(jìn)行優(yōu)化，并將其應(yīng)用于日本血吸蟲病人血清中循環(huán)抗體（Sj-Ab）的檢測(cè)。主要研究?jī)?nèi)容包括：
　　 1)對(duì)兩種國(guó)產(chǎn)超順磁性微球的性能進(jìn)行了對(duì)比，在對(duì)磁球的封閉條件摸索的基礎(chǔ)上選擇了性能較好的磁球；
　　 2)對(duì)關(guān)鍵原料的偶聯(lián)技術(shù)進(jìn)行了研究。在優(yōu)化條件下用FITC直接標(biāo)記SEA，用EDC法偶聯(lián)磁球與抗FITC抗體，按照SMCC法對(duì)堿性磷酸酶與二抗進(jìn)行偶聯(lián)；
　　

3、3)通過優(yōu)化關(guān)鍵原料用量、反應(yīng)時(shí)間，顯色體系等免疫分析條件，初步建立了檢測(cè)Sj-Ab的MEIA法，并將其用于實(shí)際血清樣品的檢測(cè)。
　　 最終，建立了日本血吸蟲循環(huán)抗體的MEIA檢測(cè)方法，以SEA-FITC為抗原，磁球-抗FITC抗體為分離固相，單磷酸酚酞為堿性磷酸酶顯色底物，血清樣品稀釋200倍后檢測(cè)，總測(cè)試時(shí)間約65min。該方法與甲狀腺病人血清無交叉反應(yīng)，特異性較高，與ELISA法（CV≤18.1％）相比，MEIA法的CV≤