磁分離酶聯(lián)免疫分析方法在日本血吸蟲病診斷中的應用.pdf

1、日本血吸蟲病是一種人獸共患的寄生蟲病，在我國主要分布于長江中下游地區(qū)。診斷工作是控制血吸蟲病的關鍵步驟，常用的診斷方法包括病原學方法和免疫學方法，但病原學方法操作繁瑣，而現有免疫學方法存在假陰性率高，靈敏度低等不足。
　　 磁分離酶聯(lián)免疫分析（MEIA）法是一種將磁分離和酶聯(lián)免疫分析技術相結合，實現對抗原或抗體進行測定的方法。MEIA法由于具有簡便快速、靈敏特異、樣品用量少、易實現自動化的特點，在免疫分析領域的應用越來越廣泛。本

2、研究在對關鍵原料偶聯(lián)技術研究的基礎上，對磁酶免分析條件進行優(yōu)化，并將其應用于日本血吸蟲病人血清中循環(huán)抗體（Sj-Ab）的檢測。主要研究內容包括：
　　 1)對兩種國產超順磁性微球的性能進行了對比，在對磁球的封閉條件摸索的基礎上選擇了性能較好的磁球；
　　 2)對關鍵原料的偶聯(lián)技術進行了研究。在優(yōu)化條件下用FITC直接標記SEA，用EDC法偶聯(lián)磁球與抗FITC抗體，按照SMCC法對堿性磷酸酶與二抗進行偶聯(lián)；
　　

3、3)通過優(yōu)化關鍵原料用量、反應時間，顯色體系等免疫分析條件，初步建立了檢測Sj-Ab的MEIA法，并將其用于實際血清樣品的檢測。
　　 最終，建立了日本血吸蟲循環(huán)抗體的MEIA檢測方法，以SEA-FITC為抗原，磁球-抗FITC抗體為分離固相，單磷酸酚酞為堿性磷酸酶顯色底物，血清樣品稀釋200倍后檢測，總測試時間約65min。該方法與甲狀腺病人血清無交叉反應，特異性較高，與ELISA法（CV≤18.1％）相比，MEIA法的CV≤