MRI示蹤干細胞同種異體修復兔關節(jié)軟骨缺損的實驗研究.pdf

1、目的：
　　探討靜脈注射USPIO濃度為20mg/kg時，兔骨髓間充質干細胞的標記率及USPIO對兔骨髓間充質干細胞增殖性及多向分化能力的影響，并利用MRI活體示蹤USPIO標記兔骨髓間充質干細胞移植修復兔關節(jié)軟骨缺損的進程及信號強度，為進一步實驗的USPIO靜脈注射濃度的設置提供實驗基礎。
　　方法：
　　(1)將6只新西蘭白兔完全隨機分為2組，每組3只，以組為單位，實驗組經耳緣靜脈注射20mg/kg USPIO，對

2、照組不做任何處理，48h后處死各組兔，分離、培養(yǎng)兔BMSCs至第三代作為實驗對象；
　　(2)普魯士藍染色測量各組兔BMSCs的磁標記率，增強型cck-8試劑盒觀察BMSCs增殖性強弱，并對各組兔BMSCs進行多向誘導分化實驗，觀察成骨、成脂、成軟骨能力的變化；
　?。?）將36只新西蘭白兔完全隨機分為4組，每組9只，制備兔雙膝關節(jié)軟骨缺損模型，實驗組注入USPIO標記兔 BMSCs-海藻酸鈉凝膠復合體，陽性對照組注入未標記

3、兔 BMSCs-海藻酸鈉凝膠復合體，陰性對照組注入純海藻酸鈉凝膠，空白組不做任何處理，分別于術后1個月、2個月、3個月進行大體觀察和MRI掃描，并進行組織學研究。
　　（4）收集數據，并進行統(tǒng)計學分析。
　　結果：
　　（1）經兔耳緣靜脈注射20mg/kg USPIO后提取、培養(yǎng)獲得的兔BMSCs與對照組兔BMSCs相比，細胞形態(tài)基本相同；
　?。?）普魯士藍染色顯示經USPIO標記的兔BMSCs胞質內可見大量藍

4、染顆粒，表明USPIO已被兔BMSCs吞噬；利用增強型CCK-8試劑盒反應，通過自動酶標儀測得吸光度值繪制增殖曲線顯示，濃度為20mg/kg的USPIO不影響兔BMSCs的增殖活性；經多向誘導分化實驗后顯示，濃度為20mg/kg的USPIO不影響兔BMSCs的多向分化能力；
　　（3）BMSCs移植治療兔膝關節(jié)軟骨缺損顯示,隨著時間的遞增，標記細胞移植組與未標記細胞移植組的軟骨缺損逐漸被修復，純海藻酸鈉移植組與空白組的軟骨缺損修復

5、緩慢。
　　（4）統(tǒng)計學分析結果顯示，BMSCs移植治療兔膝關節(jié)軟骨缺損后，同時期標記細胞移植組與未標記細胞移植組的修復效果未見明顯差異（P>0.05），與純海藻酸鈉移植組、空白組修復效果相比有統(tǒng)計學差異（P<0.05）；同時期標記細胞移植組與未標記細胞移植組的軟骨缺損處的SI未見明顯統(tǒng)計學差異（P>0.05）。
　　結論：
　?。?）當靜脈注射USPIO濃度為20mg/kg時，兔BMSCs可被USPIO標記；