兔骨髓間充質干細胞同種異體修復關節(jié)軟骨缺損的實驗研究.pdf

1、目的:培養(yǎng)高純度兔骨髓間充質干細胞(BM-MSCs)并誘導其向軟骨細胞定向分化;探討兔骨髓間充質干細胞復合透明質酸鈉對兔關節(jié)軟骨缺損的修復作用。
　　 方法:1.穿刺抽取兔骨髓，采用改良密度梯度離心法獲取BM-MSCs，在含15％胎牛血清的低糖DMEM培養(yǎng)液中培養(yǎng)擴增，利用流式細胞儀在P3代時測定細胞表型以鑒定。2.取P2代細胞分為2組:誘導組，加入軟骨誘導液;對照組，加入普通培養(yǎng)液。倒置顯微鏡下觀察細胞生長狀況，21天后進行阿

2、爾辛藍染色檢測細胞外基質中糖胺多糖的分泌和表達。3.將18只家兔在全麻下制備兔膝關節(jié)全層軟骨缺損后隨機分為三組，實驗組缺損處植入BM-MSCs/透明質酸鈉復合物，對照組單純植入透明質酸鈉，空白組不做特殊處理，于術后6、12周處死動物，進行肉眼大體觀察、組織學檢測，并對相關指標進行改良Pineda法組織學評分，所得評分采用統(tǒng)計軟件SPSS13.0進行統(tǒng)計學分析。
　　 結果:1.分離所得細胞具有典型成纖維樣細胞形態(tài)，貼壁;細胞表型

3、檢測結果為:CD29陽性率90.6％，CD44陽性率99.1％，CD45陰性率96.5％。2.誘導組細胞呈磷片形或多角形聚集生長，阿爾辛藍染色呈陽性;對照組細胞依舊呈典型的長梭狀貼壁生長，阿爾辛藍染色呈陰性。3.實驗組軟骨缺損處為軟骨樣組織修復，阿爾辛藍染色及Ⅱ型膠原免疫組化染色呈陽性;對照組和空白組主要為纖維組織修復，內有少量軟骨細胞，阿爾辛藍染色及Ⅱ型膠原免疫組化染色呈弱陽性。實驗組在各個時期與對照組、空白組的評分比較差異都具有統(tǒng)計