兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞同種異體修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨缺損的實驗研究.pdf

1、目的:培養(yǎng)高純度兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BM-MSCs)并誘導(dǎo)其向軟骨細(xì)胞定向分化;探討兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合透明質(zhì)酸鈉對兔關(guān)節(jié)軟骨缺損的修復(fù)作用。
　　 方法:1.穿刺抽取兔骨髓，采用改良密度梯度離心法獲取BM-MSCs，在含15％胎牛血清的低糖DMEM培養(yǎng)液中培養(yǎng)擴(kuò)增，利用流式細(xì)胞儀在P3代時測定細(xì)胞表型以鑒定。2.取P2代細(xì)胞分為2組:誘導(dǎo)組，加入軟骨誘導(dǎo)液;對照組，加入普通培養(yǎng)液。倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長狀況，21天后進(jìn)行阿

2、爾辛藍(lán)染色檢測細(xì)胞外基質(zhì)中糖胺多糖的分泌和表達(dá)。3.將18只家兔在全麻下制備兔膝關(guān)節(jié)全層軟骨缺損后隨機(jī)分為三組，實驗組缺損處植入BM-MSCs/透明質(zhì)酸鈉復(fù)合物，對照組單純植入透明質(zhì)酸鈉，空白組不做特殊處理，于術(shù)后6、12周處死動物，進(jìn)行肉眼大體觀察、組織學(xué)檢測，并對相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行改良Pineda法組織學(xué)評分，所得評分采用統(tǒng)計軟件SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。
　　 結(jié)果:1.分離所得細(xì)胞具有典型成纖維樣細(xì)胞形態(tài)，貼壁;細(xì)胞表型

3、檢測結(jié)果為:CD29陽性率90.6％，CD44陽性率99.1％，CD45陰性率96.5％。2.誘導(dǎo)組細(xì)胞呈磷片形或多角形聚集生長，阿爾辛藍(lán)染色呈陽性;對照組細(xì)胞依舊呈典型的長梭狀貼壁生長，阿爾辛藍(lán)染色呈陰性。3.實驗組軟骨缺損處為軟骨樣組織修復(fù)，阿爾辛藍(lán)染色及Ⅱ型膠原免疫組化染色呈陽性;對照組和空白組主要為纖維組織修復(fù)，內(nèi)有少量軟骨細(xì)胞，阿爾辛藍(lán)染色及Ⅱ型膠原免疫組化染色呈弱陽性。實驗組在各個時期與對照組、空白組的評分比較差異都具有統(tǒng)計