骨髓間充質干細胞復合關節(jié)軟骨脫細胞基質修復兔軟骨全層缺損的實驗研究.pdf

1、目的：1 探討骨髓間充質干細胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells。BMSCs)的分離、培養(yǎng)和鑒定。2探討關節(jié)軟骨脫細胞基質支架材料的改良制備方法。3研究BMSCs復合關節(jié)軟骨脫細胞基質修復兔全層關節(jié)軟骨缺損，對修復組織進行評價，評價修復效果，為臨床應用軟骨組織工程學方法修復軟骨缺損提供實驗基礎和理論依據(jù)。 方法：1 實驗動物選用健康的青紫藍兔24只，3～4月齡，體重2.5—3.

2、5kg，應用貼壁培養(yǎng)篩選法結合密度梯度離心法進行分離BMSCs，并行體外擴增培養(yǎng)。用BMSCs特異性標記抗體和造血細胞特異性標記抗體對分離擴增的細胞進行免疫細胞化學方法鑒定。2以 Cotlrtman 等提出的四步法為基礎的改良法制備關節(jié)軟骨脫細胞基質，行組織學觀察和掃描電鏡觀察。3 DMEM中加入轉化生長因子(TGF-β)、地塞米松、維生素C，將第二代BMSCs懸液，DMEM培養(yǎng)液加入裝有適量關節(jié)軟骨脫細胞支架材料的培養(yǎng)瓶中，體外培養(yǎng)

3、3 天，將復合物移植于兔膝關節(jié)軟骨缺損處。按照完全隨機的原則分三組，BMSC和關節(jié)軟骨脫細胞基質復合體實驗組、關節(jié)軟骨脫細胞基質對照和空白對照組。實驗組股骨髁間軟骨缺損處(4×3mm)植入BMSC和關節(jié)軟骨脫細胞基質復合物，對照組單純植入關節(jié)軟骨脫細胞基質，空白對照組不作任何植入，分別于術后8周和16周各處死4只動物，對修復組織行大體、組織學及免疫組化染色觀察，參照Sellers的關節(jié)軟骨組織學評分標準對修復組織進行評分，數(shù)據(jù)輸入sPS

4、S 10.0軟件進行統(tǒng)計分析，比較各組的評分差異是否具有統(tǒng)計學意義。 結果：1 本實驗分離培養(yǎng)的BMSCs形態(tài)學特征明顯，免疫細胞化學方法鑒定結果為CD44陽性表達，CD34陰性表達。2關節(jié)軟骨脫細胞基質表面粗糙不平，有彈性，掃描電鏡下顯示軟骨陷窩呈蜂窩狀，具有多孔性，未見到殘余的細胞核、細胞器。3術后16周BMSC和關節(jié)軟骨脫細胞基質實驗組修復組織呈透明軟骨樣，表面光滑平坦，與周圍軟骨及軟骨下骨整合良好，而DBM組和空白對照組

5、為纖維性修復和無修復。修復組織大體組織學評分評分結果，BMSC和關節(jié)軟骨脫細胞基質實驗組明顯優(yōu)于DBM對照組和空白對照組(P<0.05)，具有顯著性差異。 結論：1 本實驗分離培養(yǎng)所得的BMSCs是可以作為軟骨組織工程的種子細胞。2以改良法制備的關節(jié)軟骨脫細胞基質具有多孔性，除去了細胞核、細胞器，可以作為軟骨組織工程較為理想的支架材料。3應用軟骨組織工程學的原理，BMSCs復合關節(jié)軟骨脫細胞支架材料修復全層關節(jié)軟骨缺損是一種可行