Robo4及CXCR4基因在成人初發(fā)急性髓系白血病中的表達及臨床意義分析.pdf

1、目的：檢測成人初發(fā)急性髓系白血?。╝cute myeloid leukemia，AML）患者Robo4及CXCR4基因的表達量，并探討其與AML患者臨床實驗室特點、療效及預后的相關性，進而對AML患者的預后評估和治療提供新思路。
　　方法：⑴收集初發(fā)成人AML患者骨髓標本及正常對照骨髓標本。⑵從GeneBank檢索Robo4及CXCR4基因RNA序列，應用 primer5.0軟件設計引物，經(jīng)BLAST進行同源檢索后，引物由上海生工

2、生物公司合成，并對引物進行驗證，以β-actin做為內(nèi)參基因，運用SYBR Green熒光染料法對Robo4及CXCR4基因進行實時定量 PCR分析，使用2-△△CT法計算 Robo4及 CXCR4基因的相對表達量。⑶收集AML患者的性別、年齡、髓外浸潤情況、療效、無復發(fā)生存（Relapse free survival，RFS）時間等臨床資料，初診時外周血細胞計數(shù)、乳酸脫氫酶計數(shù)、骨髓原始細胞比例、WT1基因表達水平、細胞遺傳學、分子學

3、突變及融合基因等實驗室結(jié)果，并對其進行分析，做預后隨訪。⑷根據(jù)Robo4及CXCR4基因的中位表達水平進行分組，采用SPSS-21統(tǒng)計軟件對各組患者之間的臨床實驗室特征、療效及RFS進行統(tǒng)計分析。
　　結(jié)果：①共納入75例成人初發(fā)AML患者，其中男性51例，女性24例，中位年齡為43（15-72）歲，其中69例接受了誘導化療，6例患者放棄治療，接受治療的69例患者中40例達完全緩解（Complete remission，CR），8

4、例達部分緩解（Partial remission，PR），21例未達緩解。對達到緩解的48例患者進行隨訪，其中1例失訪，中位隨訪時間為8.3（0.5-11.5）個月，至隨訪截止日期，有19例患者疾病復發(fā)，中位RFS為6.2個月。②Robo4基因中位表達水平在AML患者為37.66（0.005-74502.44），正常對照者為0.774（0.135-25.36），AML患者Robo4基因表達水平明顯增高，差異有統(tǒng)計學意義（P=0.006）

5、；CXCR4基因中位表達水平在AML患者中為3.40（0.002-37.40），正常對照者為0.935（0.241-6.463），AML患者CXCR4基因表達水平明顯增高，差異有統(tǒng)計學意義（P=0.003）。③以Robo4基因的中位表達量37.66為界限，將AML患者分為高表達組（38例）和低表達組（37例），Robo4基因的表達水平男性明顯高于女性（中位數(shù)分別為135.67和15.73，P=0.004）；Robo4基因高表達組血紅蛋白

6、濃度明顯高于低表達組（均數(shù)分別為83.60g/L和72.78g/L，P=0.032）；高表達組的低危患者比例明顯低于低表達組（分別為13.16％和32.43%，P=0.046）。④以CXCR4基因的中位表達量3.40為界限，將AML患者分為高表達組（38例）和低表達組（37例），以CXCR4基因作為分類變量進行分析，高表達組中具有不良的染色體核型患者比例為23.68%，明顯高于低表達組0.0%， P=0.04%；高表達組的高危患者比例為

7、36.84%，明顯高于低表達組的13.51%， P=0.043；高表達組WT1基因中位表達水平為760.0（7.4-301001.0），明顯低于低表達組2596.0（0.0-20812.0），P=0.042；高表達組AML1-ETO融合基因陽性患者的比例為7.89%，明顯低于低表達組27.02%，P=0.029。當CXCR4基因表達水平作為連續(xù)變量分析時，髓外浸潤患者的CXCR4基因中位表達量明顯高于無浸潤組（中位數(shù)分別為10.52和3

8、.54，P=0.021）；染色體核型不良組的CXCR4基因中位表達量明顯高于預后中等組和良好組（中位數(shù)分別為7.81、3.54和0.92，P=0.003）；AML1-ETO融合基因陽性組的CXCR4基因表達水平明顯低于陰性組（中位數(shù)分別為0.92和4.06，P=0.010）。⑤Robo4基因中位表達水平在CR組為34.78（0.001-5431.0），明顯低于NR組的290.17（3.48-74502.0），P=0.028； CXCR4

9、基因中位表達水平在CR組為3.06（0.001-37.40），明顯低于NR組的6.94（1.72-24.17），P=0.039。此外，將Robo4和 CXCR4基因表達水平聯(lián)合分析時發(fā)現(xiàn)兩者均高表達組的NR率明顯高于兩者均低表達組（分別為44.0%和15.0%，P=0.037）。⑥對47例獲得緩解的患者進行了RFS分析，將Robo4和CXCR4基因表達水平進行單獨分析時，低表達組與高表達組在RFS上并沒有統(tǒng)計學差異（P＞0.05）；將

10、Robo4和 CXCR4基因表達水平聯(lián)合分析時發(fā)現(xiàn)兩者均高表達組的RFS（預計中位RFS為6.0個月，95%CI4.65-7.34），明顯短于兩者均低表達組， P=0.030。（由于本研究隨訪時間較短，至隨訪截至時間，低表達組累計復發(fā)率未達到50%，故未得出預計中位RFS時間）。
　　結(jié)論：⑴初發(fā)成人AML患者中Robo4及CXCR4基因表達水平明顯高于正常人。⑵Robo4基因表達水平與危險度分層低危及CR率呈負相關，提示Robo