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文檔簡介
1、目的:
研究SOX4基因在慢性髓系白血?。–ML)中的作用機制,探討SOX4基因作為CML靶點的可能性。
方法:
培養(yǎng)慢性髓系白血病 K562細胞,將構(gòu)建好的 siRNA-SOX4表達質(zhì)粒pLVE-1680及空載體pLVE經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)入K562細胞后檢測SOX4 mRNA和蛋白表達水平;qRT-PCR方法檢測p53、bax、c-myc、cyclinD1、bcl-2基因的表達情況;RT-PCR方法檢測Foxo3
2、a、C/EBPα基因的表達情況;CCK8法檢測細胞增殖情況;基因芯片檢測干擾組和對照組中差異基因的表達。
結(jié)果:
RT-PCR和Western blot檢測結(jié)果顯示含目的基因siRNA-SOX4的K562細胞株已成功構(gòu)建表達;siRNA SOX4-K562組C/EBPα、bax、Foxo3a、cyclinD1基因的mRNA表達量分別為0.1609±0.0095、1.2410±0.0602、1.1450±0.0461、
3、1.7240±0.0657,顯著高于K562組及K562-空載體組(P<0.01,P<0.05,P<0.05,P<0.05);c-myc、bcl-2、p53基因mRNA表達量分別為0.9171±0.00953、0.6507±0.0090、0.4952±0.0220,顯著低于 K562組及 K562-空載體組(P<0.01,P<0.01,P<0.01);結(jié)果顯示siRNASOX4-K562組細胞增殖程度顯著低于K562細胞組及 K562-
4、空載體細胞組(P<0.05);以差異基因2倍為限,基因芯片檢測結(jié)果干擾組較對照組升高的基因有4個,較對照組降低的基因有7個。兩組差異表達基因 Pathyway富集功能分析結(jié)果顯示最集中的pathyway是血小板激活、白細胞跨膜遷移以及病灶粘連。
結(jié)論:
SOX4基因在慢性髓系白血病中發(fā)揮癌基因的作用,在 K562細胞中干擾SOX4能夠抑制細胞增殖并促進細胞凋亡;基因芯片檢測結(jié)果表明SOX4可能通過下調(diào)RAP1A,上調(diào)
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