Sympk基因?qū)π∈笊彻δ艿挠绊懠俺醪綑C(jī)制探索.pdf

1、哺乳動(dòng)物的配子（精子和卵子）都是由原始生殖細(xì)胞發(fā)展而來(lái)。其中精子發(fā)生包括精原細(xì)胞的增殖、精母細(xì)胞的減數(shù)分裂和精子細(xì)胞的變形，是一個(gè)高度專一的分化過(guò)程。生精細(xì)胞基因表達(dá)的一個(gè)重要特征就是通過(guò)選擇性多聚腺苷酸化產(chǎn)生細(xì)胞特異性的mRNAs，而且通常是利用非經(jīng)典的AAUAAA非依賴性的多聚腺苷酸化信號(hào)通路。研究表明，生精細(xì)胞似乎比體細(xì)胞更青睞選擇多聚腺苷酸化，而且大量的生精細(xì)胞轉(zhuǎn)錄本與體細(xì)胞轉(zhuǎn)錄本相比具有較短的3'UTR，這說(shuō)明了在生精細(xì)胞中優(yōu)

2、先利用了更多的近端多聚腺苷酸化位點(diǎn)。
　　在前期實(shí)驗(yàn)室蛋白質(zhì)組學(xué)工作中，構(gòu)建了多個(gè)與精子發(fā)生相關(guān)的蛋白表達(dá)譜系，其中在四倍體生精細(xì)胞譜系中，鑒定到了Sympk基因，并投入了更多的關(guān)注。文獻(xiàn)報(bào)道在體細(xì)胞的經(jīng)典多聚腺苷酸化通路中，SYMPK蛋白作為一個(gè)腳手架蛋白協(xié)調(diào)CPSF和CstF的相互作用，但在精子發(fā)生過(guò)程中，其是否參與生精細(xì)胞特異的多聚腺苷酸化通路，以及由此非經(jīng)典的多聚腺苷酸化通路與體細(xì)胞的通路究竟存在哪些差異，是否還有其特異的

3、相互作用的蛋白存在，這些問(wèn)題都促使深入研究Sympk在小鼠精子發(fā)生過(guò)程中的功能。
　　本研究首先對(duì)該基因在小鼠體內(nèi)不同時(shí)期的表達(dá)情況進(jìn)行了定量(Realtime PCR)和定位研究（免疫組化和熒光），同時(shí)引進(jìn)了具有兩個(gè)loxP位點(diǎn)的類似于Sympk基因全敲的雜合子小鼠，在該小鼠保種和繁殖的過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)敲除鼠生出的子代小鼠沒(méi)有純合子的存在，這不符合孟德爾遺傳定理，因此猜測(cè)小鼠在胚胎時(shí)期純合子致死。進(jìn)一步將此雜合子小鼠與生精細(xì)胞特定D

4、DX4-Cre小鼠進(jìn)行交配構(gòu)建了生精細(xì)胞特異性敲除小鼠(CKO)，并進(jìn)行一系列生殖力測(cè)試和表型分析。在成年小鼠中確認(rèn)了其雄性不育的表型，但是在剛出生的CKO小鼠中，卻能見到精原細(xì)胞。隨后進(jìn)一步分析表型出現(xiàn)的時(shí)間，2周的小鼠睪丸生精小管內(nèi)已經(jīng)出現(xiàn)了大量空泡化，而1周小鼠睪丸生精小管雖然沒(méi)有明顯改變，但是生精細(xì)胞數(shù)量已經(jīng)開始有所下降，因此，將表型發(fā)生的時(shí)間點(diǎn)初步確定在1w左右的小鼠。目前正在取1w的睪丸組織作為標(biāo)本留作RNA芯片數(shù)據(jù)的分析。