仙茅酚苷類成分抗骨質(zhì)疏松及雌激素作用研究.pdf

1、中藥仙茅來源于石蒜科植物仙茅Curculigo orchioides Gaerm.的干燥根莖,味辛、性熱、有毒,具有補(bǔ)腎陽、益精血、強(qiáng)筋骨、祛寒濕等功效,具有調(diào)節(jié)免疫、抗骨質(zhì)疏松、保肝、保護(hù)心血管系統(tǒng)等多種藥理活性。仙茅的主要化學(xué)成分為酚類成分及其衍生物、環(huán)菠蘿蜜烷型三萜皂苷、木脂素,黃酮等。本課題組研究發(fā)現(xiàn)仙茅乙醇提取物能夠減少去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠骨質(zhì)的丟失,具有抗骨質(zhì)疏松作用。活性成分篩選結(jié)果表明仙茅抗骨質(zhì)疏松的活性成分為酚苷類成分。

2、基于上述研究基礎(chǔ),本課題著重進(jìn)行了以下幾方面研究:
　　 建立了仙茅中苔黑酚葡萄糖苷,仙茅苷,仙茅素A的HPLC含量測定方法。以仙茅中三種代表性酚苷類成分苔黑酚葡萄糖苷,仙茅苷,仙茅素A的含量為考察指標(biāo),以HPLC進(jìn)行含量測定,考察乙醇濃度、提取次數(shù)、提取時(shí)間、溶劑倍量對(duì)酚苷類成分提取效率的影響,通過四因素三水平L9(34)正交試驗(yàn)確定仙茅酚苷類成分的最佳提取方法。優(yōu)選出的最佳提取工藝為10倍量70％7,醇回流提取3次,每次12

3、0分鐘。以優(yōu)化的提取工藝提取仙茅藥材,調(diào)整提取液濃度為每毫升含1g原藥材,以1:1的上樣量(藥液體積:樹脂床體積),上樣于D101大孔樹脂,待吸附后,分別以水、10％、20％、30％、40％、50％、60％的乙醇洗脫,HPLC檢測洗脫液,確定10％乙醇洗脫部位富含苔黑酚類酚苷,30％乙醇部位富含苯甲酸酯類酚苷仙茅苷和仙茅素A。將10％乙醇洗脫部位和30％乙醇洗脫部位用水溶解后分別再上D101大孔樹脂,分別收集10％乙醇洗脫部位和30％乙

4、醇洗脫部位,濃縮干燥后,10％乙醇洗脫部位苔黑酚葡萄糖苷含量達(dá)39％:30％乙醇洗脫部位仙茅苷和仙茅素A含量分別為46％和4％。通過D101大孔樹脂柱、凝膠柱、ODS反相柱、MCI柱,制備液相對(duì)10％乙醇洗脫部位和30％乙醇洗脫部位進(jìn)行化學(xué)成分的分離鑒定,共分離得到10個(gè)化合物。其中8個(gè)為仙茅酚苷類成分,2個(gè)為呋喃類化合物。
　　 以三月齡去卵巢雌性大鼠為模型考察仙茅提取物及仙茅酚苷類成分的抗骨質(zhì)疏松作用。研究發(fā)現(xiàn)雌性大鼠去卵巢

5、后,子宮萎縮,已造成絕經(jīng)狀態(tài);血清堿性磷酸酶活性升高,U-Ca/Cr值升高,股骨骨密度降低,血清抗氧化酶活力水平下降,脂質(zhì)過氧化物含量升高。仙茅提取物及不同劑量的苯甲酸酯類酚苷成分均能提高去卵巢大鼠的骨密度,且中、高劑量組大鼠骨密度與去卵巢模型組大鼠比較具有顯著性差異(P＜0.01)。仙茅苔黑酚類酚苷成分對(duì)去卵巢大鼠骨密度的作用不顯著。這表明仙茅的抗骨質(zhì)疏松活性成分為其所含的苯甲酸酯類酚苷,如仙茅苷等,這些成分通過抑制骨吸收減少骨質(zhì)的丟

6、失。代謝組學(xué)和血清抗氧化酶活性分析表明仙茅酚苷類成分通過提高機(jī)體的抗氧化能力改菩骨代謝,減少骨質(zhì)的丟失。
　　 選用17天齡性未成熟的雌性SD大鼠幼鼠,以子宮濕重與100g體重之比作為評(píng)價(jià)仙茅雌激素樣活性的指標(biāo),考察了仙茅乙醇提取物及各D101大孔樹脂的純化部位的雌激素樣作用,研究結(jié)果表明仙茅總提物及其各純化部位均無明顯的雌激素樣作用。選用雌激素受體陽性細(xì)胞模型(MCF-7)考察了仙茅中的酚類化合物:仙茅苷、仙茅素A、2,6-二

7、甲氧基苯甲酸、苔黑酚葡萄糖苷、苔黑酚龍膽二糖苷對(duì)MCF-7細(xì)胞的增殖作用的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn)陽性藥雌二醇(E2)則具有顯著促細(xì)胞增殖作用,各受試藥物對(duì)細(xì)胞增殖無明顯作用,推斷仙茅各受試藥物即無雌激素樣作用。去卵巢大鼠給予苔黑酚類酚苷和苯甲酸酯類酚苷12周后,其雌激素受體陽性器官乳腺、陰道和子宮的組織構(gòu)造與去卵巢對(duì)照大鼠相比較沒有顯著變化,但其孕激素受體、雌激素受體α和β的表達(dá)有一定程度的降低,這些結(jié)果說明仙茅苔黑酚類酚苷和苯甲酸酯類酚苷具有

8、抗雌激素樣作用。
　　 綜上所述,本課題獲得了仙茅酚苷類成分的制備方法,分離鑒定了其中主要的酚苷類化合物,闡明了其抗骨質(zhì)疏松和抗雌激素樣作用的物質(zhì)基礎(chǔ)。通過抗骨質(zhì)疏松和雌激素樣活性分析,初步明確了仙茅酚苷類成分通過抗氧化和抗雌激素樣作用抑制骨丟失的作用機(jī)制。不足之處在于仙茅酚苷類成分抗雌激素樣作用的研究尚不夠全面深入,有待在以后的研究中補(bǔ)充、完善,以揭示仙茅酚苷類成分抗雌激素樣作用的特點(diǎn),明確其可能對(duì)生物或人體產(chǎn)生的有益或不利作