人膠質(zhì)瘤細胞的干細胞特性及誘導(dǎo)分化研究.pdf

1、目的：
　　通過對人膠質(zhì)瘤細胞株U251的干細胞特性和多向分化潛能的相關(guān)研究，揭示膠質(zhì)瘤細胞的細胞生物學(xué)特性；進一步研究膠質(zhì)瘤細胞向脂肪細胞及成骨細胞分化的條件及可能的機制；進一步展望誘導(dǎo)分化方法作為一種新穎的腦膠質(zhì)瘤治療方法的臨床應(yīng)用前景。
　　方法：
　　常規(guī)傳代培養(yǎng)膠質(zhì)瘤細胞株U251,并將U251細胞傳代培養(yǎng)于24孔細胞培養(yǎng)板中，恒溫CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)。待細胞貼壁后，用4％多聚甲醛固定U251細胞，并檢測U2

2、51中干細胞標(biāo)志物Sall4、NCAM、Oct4、Sox2、Nestin、和S100β表達情況，熒光顯微鏡下觀察U251細胞上述標(biāo)志物的表達情況。將貼壁生長的U251細胞分別經(jīng)成脂肪細胞誘導(dǎo)培養(yǎng)基(含有2μmol/L胰島素、500μmol/L（IBMX）、1μmol/L地塞米松、200μmol/L吲哚美辛)和成骨細胞誘導(dǎo)培養(yǎng)基（含有100mmol/L地塞米松、10mmol/Lβ-甘油磷酸鈉及0.05mmol/L維生素C）誘導(dǎo)分化后，分別

3、用油紅O染色方法檢測細胞中脂滴形成情況，茜素紅染色檢測細胞中鈣結(jié)節(jié)形成情況。CCK8法檢測經(jīng)誘導(dǎo)分化后U251細胞生長曲線。免疫蛋白印跡法分別測定脂肪細胞和成骨特異性蛋白表達以及誘導(dǎo)分化過程中細胞自噬和凋亡蛋白表達情況。
　　結(jié)果：
　　1.多種干細胞標(biāo)志物均在人膠質(zhì)瘤細胞株U251中穩(wěn)定表達。免疫熒光結(jié)果顯示在U251中神經(jīng)細胞黏附分子NCAM、神經(jīng)嵴干細胞標(biāo)記物Nestin、神經(jīng)膠質(zhì)細胞標(biāo)記物S100β，多能干細胞標(biāo)記物

4、Sall4、Oct4及神經(jīng)干細胞的標(biāo)記物Sox2均能夠穩(wěn)定表達。
　　2.U251細胞經(jīng)誘導(dǎo)后可以向脂肪細胞分化。在貼壁生長的膠質(zhì)瘤細胞中加入成脂細胞誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基后，經(jīng)過誘導(dǎo)不同的時間梯度，油紅O染色發(fā)現(xiàn)膠質(zhì)瘤細胞中出現(xiàn)脂滴，并且隨著誘導(dǎo)的時間越長，脂滴數(shù)量增多并融合增大，且細胞增殖速度減慢，這點由CCK8實驗結(jié)果得以證實。通過免疫蛋白印跡實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)后的膠質(zhì)瘤細胞中脂肪細胞相關(guān)特異性蛋白表達增加。
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5、.U251細胞經(jīng)誘導(dǎo)可以向成骨細胞分化。在貼壁生長的膠質(zhì)瘤細胞中加入成骨細胞誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基后，經(jīng)過誘導(dǎo)不同的時間梯度，茜素紅染色發(fā)現(xiàn)膠質(zhì)瘤細胞中出現(xiàn)大量鈣結(jié)節(jié)，并且隨著誘導(dǎo)時間的延長，鈣結(jié)節(jié)增多。CCK8實驗結(jié)果顯示經(jīng)誘導(dǎo)分化后腫瘤細胞增殖減慢；免疫蛋白印跡實驗結(jié)果顯示成骨細胞相關(guān)特異性蛋白表達增多，并且隨著誘導(dǎo)時間的延長細胞凋亡、自噬及增殖相關(guān)蛋白表達也增加。
　　結(jié)論：
　　1.人膠質(zhì)瘤細胞U251具有干細胞特性和多向誘