膠質(zhì)瘤干細(xì)胞誘導(dǎo)宿主肝組織內(nèi)腫瘤間質(zhì)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分：雙色熒光示蹤人膠質(zhì)瘤干細(xì)胞肝臟異位移植模型的建立及生物學(xué)特征分析
　　目的：通過(guò)建立紅、綠雙色熒光示蹤膠質(zhì)瘤干細(xì)胞異位肝臟移植模型，為進(jìn)一步研究異位移植瘤的腫瘤微環(huán)境奠定基礎(chǔ)。
　　方法：將攜帶紅色熒光蛋白（RFP）基因的慢病毒轉(zhuǎn)染人膠質(zhì)瘤干細(xì)胞SU3，獲得穩(wěn)定高表達(dá)RFP的SU3-RFP細(xì)胞株，接種于表達(dá)綠色熒光蛋白（GFP）的轉(zhuǎn)基因裸小鼠肝臟內(nèi)，致瘤后取部分荷瘤鼠載瘤肝臟，于熒光成像系統(tǒng)觀察；其它荷瘤鼠用4％多

2、聚甲醛心臟灌注后，取載瘤肝臟固定脫水，OCT包埋后做連續(xù)冰凍切片，HE及DAPI染色后，在普通光鏡、熒光顯微鏡和共聚焦激光掃描顯微鏡下觀察移植瘤組織病理特征。
　　結(jié)果：轉(zhuǎn)染RFP基因后所得SU3-RFP細(xì)胞仍保持其干細(xì)胞特性。SU3-RFP的肝臟移植成功率為15/18（約83％）。腹腔解剖病理及活體熒光成像顯示 SU3-RFP易向肝內(nèi)及肝外臟器侵襲；在移植瘤冰凍切片中，表達(dá)RFP的腫瘤細(xì)胞和表達(dá)GFP的宿主細(xì)胞相互交織存在，共同

3、參與組成腫瘤微環(huán)境；雙色熒光示蹤清晰顯示了腫瘤細(xì)胞侵襲宿主血管、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及其與宿主細(xì)胞的融合或吞噬。
　　結(jié)論：該模型的建立為深入研究異位移植膠質(zhì)瘤微環(huán)境奠定了基礎(chǔ)；同時(shí)雙色熒光示蹤在異位移植瘤腫瘤組織重構(gòu)中的應(yīng)用對(duì)研究腫瘤細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移及其與宿主細(xì)胞相互作用等方面具有很高的實(shí)用價(jià)值。
　　第二部分：膠質(zhì)瘤干細(xì)胞可誘導(dǎo)宿主肝組織內(nèi)膠質(zhì)瘤間質(zhì)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化
　　目的：在已報(bào)道的腦內(nèi)原位移植的膠質(zhì)瘤干細(xì)胞可誘導(dǎo)宿主膠質(zhì)細(xì)胞發(fā)

4、生惡性轉(zhuǎn)化的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探索此類惡變的發(fā)生是否與腫瘤移植部位特異性微環(huán)境相關(guān)。
　　方法：將轉(zhuǎn)有紅色熒光蛋白（RFP）基因的人膠質(zhì)瘤干/祖細(xì)胞SU3-RFP接種于全身表達(dá)綠色熒光蛋白（GFP）的裸小鼠肝臟，致瘤后取移植瘤組織做常規(guī)病理檢測(cè)和細(xì)胞培養(yǎng)，從中單克隆具永生化的GFP+細(xì)胞和 GFP+/RFP+雙陽(yáng)性細(xì)胞傳代，做細(xì)胞表型分析和致瘤試驗(yàn)。
　　結(jié)果：取肝內(nèi)異位生長(zhǎng)的移植瘤組織再培養(yǎng)獲得永生化的宿主鼠源間質(zhì)細(xì)胞，并建立

5、了B4、B9、B10三株高增殖性單克隆細(xì)胞株，其中B4為共表達(dá)GFP/RFP的融合細(xì)胞，還同時(shí)表達(dá)CD1a、CD83、CD86等樹突狀細(xì)胞標(biāo)記蛋白；B9表達(dá)GFP和巨噬細(xì)胞標(biāo)記蛋白CD68、F4/80；B10表達(dá)GFP和成纖維細(xì)胞標(biāo)記蛋白FAP-α、α-SMA、S100，均為鼠源宿主細(xì)胞。3株細(xì)胞遺傳學(xué)檢測(cè)均為異倍體，在裸小鼠皮下致瘤率均為100%。
　　結(jié)論：在裸小鼠肝組織內(nèi)建立的膠質(zhì)瘤干細(xì)胞異位移植模型中，膠質(zhì)瘤干細(xì)胞在組織重