基于《傷寒論》調(diào)和氣血法研究活血化痰方對高脂血癥大鼠心肌I-R損傷的作用及機制.pdf

1、理論研究：
　　《傷寒論》創(chuàng)立了融理法方藥為一體的六經(jīng)辨證理論體系，長期以來一直有效地指導(dǎo)中醫(yī)臨床醫(yī)學(xué)辨證論治，被世人譽為?啟萬世之法程，誠醫(yī)門之圣書?。?致和平?中醫(yī)治療的最終目標(biāo)，?疏其血氣,令其調(diào)達(dá),而致和平?是?和法?的內(nèi)在本質(zhì)，張仲景拓展了《黃帝內(nèi)經(jīng)》?和法?的內(nèi)涵，奠定了和法理論與實踐的基礎(chǔ)，后世對其不斷發(fā)展補充完善，成為現(xiàn)今指導(dǎo)臨床譴方用藥的重要治則之一。
　　目前，痰瘀互阻型冠心病已經(jīng)成為臨床常見證候，該病發(fā)

2、病率在我國呈逐年增長趨勢，雖然祖國醫(yī)學(xué)對其防治已經(jīng)得到醫(yī)學(xué)界的認(rèn)可，但是安全有效，質(zhì)量可控，機制清晰的新藥尚有些匱乏。研究結(jié)果顯示《傷寒論》六經(jīng)辨證體系對闡明?痰瘀互阻型冠心病?的發(fā)生、發(fā)展以及診治有著一定的影響，六經(jīng)氣血運行失和、心神心血失調(diào)和痰瘀痹阻心脈是痰瘀互阻型冠心病的主要病因病機。痰瘀痹阻是痰瘀互阻型冠心病病機關(guān)鍵，《傷寒論》?調(diào)和氣血法?作為其重要治療策略，?調(diào)和氣血，活血化痰?使?心臟和平?。
　　以《傷寒論》?氣血

3、理論?為理論依據(jù)，以?調(diào)和氣血法?為主要治法而組方的活血化痰方為治療痰瘀互阻型冠心病的經(jīng)驗方。前期臨床研究和實驗研究顯示，本方能夠明顯改善痰瘀互阻型冠心病患者臨床癥狀，同時降低患者血脂水平。此外，線粒體DNA突變是導(dǎo)致心血管疾病的致病基礎(chǔ)，對冠心病的發(fā)生、發(fā)展有著重要的影響，經(jīng)研究氣與線粒體在來源、形態(tài)、功能、臨床癥狀以及診療上具有一定相似之處，氣的物質(zhì)屬性可能是線粒體。為此，本課題緊緊圍繞?脂質(zhì)代謝?，?保護(hù)靶器官?和?線粒體?這三大

4、目標(biāo)進(jìn)行研究，旨在探討中藥對痰瘀互阻型冠心病的防治作用和機制，為研發(fā)痰瘀互阻型冠心病的新藥提供數(shù)據(jù)支撐，也為氣的物質(zhì)屬性為線粒體的這一科學(xué)假說的深入研究提供可參數(shù)據(jù)。
　　實驗研究：
　　目的：
　　本課題主要研究基于《傷寒論》?調(diào)和氣血法?組方的活血化痰方對高脂血癥大鼠心肌缺血再灌注損傷的防治作用與機制，同時探討痰瘀痹阻心脈的實質(zhì)，也為氣的物質(zhì)屬性為線粒體的深入研究提供數(shù)據(jù)支撐。
　　方法：
　　1.活血

5、化痰方對高脂血癥大鼠脂質(zhì)代謝動態(tài)的影響。采用高脂飼料喂養(yǎng)Wistar大鼠4周，待高脂血癥大鼠模型成立后，進(jìn)行灌胃給藥，持續(xù)8周，分別在給藥4周、6周和8周后，目內(nèi)眥取血，離心，運用生化法檢測血清CHO、TG、LDL-C、HDL-C、FFA等生化指標(biāo)的水平。
　　2.活血化痰方防治高脂血癥大鼠心肌缺血再灌注損傷的作用研究。采用高脂血癥大鼠疊加心肌缺血再灌注模型，缺血40min，復(fù)灌2h，分別在給藥4周、8周運用生化法檢測CK-MB、

6、LDH；再灌注24h后Evans Blue-TTC雙染檢測心肌梗死面積。采用光鏡、電鏡技術(shù)觀察給藥8周復(fù)灌20min心肌組織形態(tài)學(xué)。
　　3.活血化痰方防治高脂血癥大鼠心肌缺血再灌注損傷機制研究。給藥8周，采用高脂血癥大鼠疊加心肌缺血再灌注模型，缺血40min，復(fù)灌2h。采用生化法和分光光度法檢測心肌組織ROS、SDH、COX和血清MDA、T-SOD、CuZn-SOD和GSH-PX酶水平，采用實時熒光定量PCR分析法和Wester

7、n
　　blotting法，分析心肌線粒體生物合成PGC-1α-NRF1-mtTFA通路，心肌脂肪酸氧化PGC-1α-PPARα通路的mRNA轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)水平，以及mtDNA拷貝數(shù)。
　　結(jié)果：
　　1.活血化痰方對脂質(zhì)代謝的影響。同正常對照組比較，高脂血癥模型組大鼠血清CHO、TG、LDL-C在飼養(yǎng)4周、8周、10周、12周生化指標(biāo)均顯著增高。同高脂血癥模型組比較，活血化痰方高劑量、中劑量組呈量效、時效相關(guān)性不同程

8、度降低高脂血癥模型大鼠血清CHO、TG、LDL-C水平，其中活血化痰方高劑量則在給藥4周、6周和8周時均顯著降低高脂血癥大鼠血脂（P＜0.05或P＜0.01）。經(jīng)計算AI值和非HDL-C值，活血化痰方各劑量組均低于高脂血癥模型組，高劑量和中劑量組優(yōu)于陽性對照藥。
　　2.活血化痰方防治高脂血癥大鼠心肌缺血再灌注損傷的作用研究。同正常對照組比較，高脂血癥模型組飼養(yǎng)8周其心肌缺血再灌注2h后CK-MB，LDH無明顯區(qū)別，飼養(yǎng)12周CK

9、-MB,LDH水平有增高趨勢；再灌注24h后，同正常對照組比較，高脂血癥模型組心肌梗死面積分別在8周，12周增多。同高脂血癥模型組比較，給藥4周后，活血化痰方中劑量能夠降低心肌缺血再灌注2hLDH水平（P＜0.05），降低復(fù)灌24h心肌梗死面積。給藥8周后降低CK-MB，顯著降低心肌梗死面積（P＜0.01）。光鏡和電鏡檢測結(jié)果顯示高脂血癥模型組心肌細(xì)胞可見明顯壞死灶，心肌細(xì)胞腫脹，炎性粒細(xì)胞浸潤，脂滴明顯，心肌線粒體腫脹，線粒體嵴紊亂。

10、活血化痰方能夠保護(hù)心肌細(xì)胞，減輕腫脹，炎性細(xì)胞浸潤，減少心臟脂滴，保護(hù)心肌線粒體，可見形態(tài)結(jié)構(gòu)完整，線粒體嵴增多，基質(zhì)密集等。
　　3.活血化痰方防治高脂血癥大鼠心肌缺血再灌注損傷的機制研究。同正常對照組比較，高脂血癥模型組心肌缺血2h后MDA水平顯著升高，T-SOD、CuZn–SOD、GSP-PX、SDH水平不同程度下降，COX和ROS值無顯著變化?；钛捣斤@著增加高脂血癥大鼠T–SOD，增加CuZn–SOD、GSP-PX、S

11、DH，降低MDA水平。顯著促進(jìn)高脂血癥大鼠心肌缺血再灌注2h后心肌線粒體PGC-1α-NRF1-mtTFA通路、心肌脂肪酸氧化PGC-1α-PPARα通路mRNA轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)水平，顯著促進(jìn)mtDNA的拷貝數(shù)。
　　結(jié)論：
　　1.《傷寒論》六經(jīng)辨證體系，治法?調(diào)和氣血法?對闡明痰瘀互阻型冠心病的病因病機，病勢進(jìn)退，臨床診治，立法譴方有著重要的指導(dǎo)作用，基于該法則下組方的活血化痰方能夠起到?調(diào)和氣血?使?心臟和平?的作用。<

12、br>　　2.本研究結(jié)果從脂質(zhì)代謝、心肌酶譜、心肌組織形態(tài)學(xué)以及線粒體生物合成等方面綜合分析，高脂血癥加重Wistar大鼠心肌缺血再灌注損傷，也客觀顯示了痰瘀痹阻心脈的實質(zhì)。
　　3.基于《傷寒論》?調(diào)和氣血法?組方的活血化痰方，可能通過降低血脂，影響脂肪酸β氧化PGC-1α—PPARα通路，進(jìn)而影響能量代謝。通過抗氧化應(yīng)激，促進(jìn)線粒體生物合成通路PGC-1α- NRF1- mtTFA，促進(jìn)mtDNA合成，兩條通路以PGC-1α為

13、交點共同防御心肌缺血-再灌注損傷。
　　4.以《傷寒論》?調(diào)和氣血法?為治法組方的活血化痰方通過調(diào)和氣血，活血化痰安神的功效，對保護(hù)高脂血癥大鼠心肌缺血再灌注心肌線粒體形態(tài)，功能，和促進(jìn)線粒體生物合成和脂肪酸β氧化相關(guān)基因的表達(dá)具有一定的影響，這為客觀證實氣的物質(zhì)屬性為線粒體提供可參數(shù)據(jù)。
　　5.實驗結(jié)果客觀顯示了中醫(yī)理論對痰瘀互阻型冠心病辨證論治立法處方的指導(dǎo)作用，同時提示西醫(yī)辨病與中醫(yī)辨證的合理結(jié)合，不僅僅體現(xiàn)在臨床診