毛蕊異黃酮通過調(diào)控TGF-β介導(dǎo)的間質(zhì)化改變抑制膠質(zhì)母細胞瘤遷徙和侵襲.pdf

1、目的：
　　采用人膠質(zhì)母細胞瘤細胞株U87和U251，研究毛蕊異黃酮（calycosin）抑制人膠質(zhì)母細胞瘤遷徙和侵襲的作用及分子機制。
　　方法：
　　1、不同濃度calycosin處理U87和U251細胞24h，MTT檢測calycosin對U87和U251生長增殖的影響。
　　2、100、200μM calycosin分別處理U87和U251細胞24h，transwell遷徙侵襲實驗檢測calycosin對

2、U87和U251遷徙和侵襲的影響；real-time PCR、western blot檢測與遷徙侵襲相關(guān)分子及TGF-β表達。
　　3、轉(zhuǎn)染TGF-β質(zhì)粒到U87細胞，calycosin處理24h，transwell遷徙侵襲實驗及western blot檢測TGF-β轉(zhuǎn)染能否逆轉(zhuǎn)calycosin對U87細胞遷徙侵襲的影響；
　　4、肩胛下注射U87細胞制作裸鼠皮下膠質(zhì)瘤模型，觀察尾靜脈注射calycosin對裸鼠的影響，每

3、兩天給裸鼠稱重測量皮下腫瘤的大小，western blot檢測瘤塊中vimentin、N-cadherin、snail等分子表達。
　　結(jié)果：
　　1、100μM、200μM calycosin處理U87、U251細胞24h，MTT檢測對U87和U251活力影響很?。≒＞0.05）。
　　2、100μM、200μM calycosin處理膠質(zhì)母細胞瘤Transwell小室實驗檢測，發(fā)現(xiàn)100μM、200μM的calyc

4、osin作用24h可以抑制U87和U251遷移和侵襲的能力，且抑制作用具有濃度劑量依賴（P＜0.05）。
　　3、100μM、200μM calycosin作用U87、U25124h對vimentin、N-cadherin、snail、MMP2、MMP9及TGF-β的表達有抑制作用，并存在濃度劑量依賴關(guān)系。
　　4、轉(zhuǎn)染TGF-β質(zhì)粒后，能逆轉(zhuǎn)calycosin的抗遷徙侵襲作用，并逆轉(zhuǎn)calycosin引起的vimentin

5、、N-cadherin等間質(zhì)相關(guān)分子及MMP2、MMP9的蛋白表達變化（P＜0.05）。
　　5、在體內(nèi)裸鼠實驗中，皮下腫瘤的大小實驗組小于對照組，皮下腫瘤中TGF-β的表達實驗組低于對照組，皮下腫瘤中vimentin、N-cadherin等分子的表達實驗組低于對照組（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、calycosin在體內(nèi)外實驗均能抑制膠質(zhì)母細胞瘤細胞的遷徙侵襲。
　　2、calycosin通過調(diào)控TGF